我的菌株是Rosetta,使用的是pET26b载体,使用0.3mM的IPTG在18度诱导表达一段可溶性蛋白,我遇到的问题是,摇瓶表达量非常好,但是上罐补料培养以后就不表达,或者表达量很低。试过多个补料方案,其中有的方案,可以长到OD600>70,但是表达量很低,个别补料方案OD600在30左右的,表达量还不错,但是也不如摇瓶,而且不是很稳定,重复性不是很理想。总体感觉,生长速度越快,表达量反而越差。质粒丢失的问题不存在,我们添加
抗生素排除了这个因素的影响了。哪位大侠是发酵高手,来指导一下,做了很久了,超级苦恼。
分析认为后期蛋白表达可能没有营养了,限制了表达,于是做了后期补充
酵母提取物的方案,结论是表达量很低,而且从电泳结果看,诱导0时和后来的2h,7h基本没有区别,就是表达量不会持续增加,而且0时就有表达量,就是有一定的渗漏表达。
分析更可能的原因时表达受到了抑制,
葡萄糖对乳糖操作子有抑制作用,一般都是补料停止一个小时后,才开始诱导的,按照葡萄糖的消耗速度,葡萄糖的浓度早都降至极低水平了,所以葡萄糖抑制可以排除,那么最可能的抑制就是乙酸抑制,还有没有别的原因,求教高手
不吝赐教的话,可以站内联系,郑重感谢