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ABTS+吸光度测试?

按照文献中的方法,以ABTS(7mmol, 10 equiv.)+K2S2O8(4.9mmol, 7 equiv.)的水溶液按1:1的体积比混合,避光情况下储存12-16h,第二天以乙醇稀释40-60倍,摇匀,静置5min,放入比色皿中测734nm的吸光度(0.7左右),测试吸光度随时间变化关系,时长为30min,发现吸光度有很明显的下降,30min大概降到0.45左右,换做水稀释时,吸光度下降更为严重,30min大概降到0.15左右。后面要测特定物质湮灭自由基的能力,这种情况势必严重干扰结果,请问业内的专家们,出现这种问题的原因主要是什么?
(1)对ABTS、K2S2O8、乙醇和水等试剂的纯度有没有严格的要求?
(2)配置好的母液大概可以使用多久?
(3)还有哪些可能出问题的地方?
望不吝赐教,谢谢!!
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共12个回答
等一等 这个需要参比调零吗???我好像没看到过 用什么调零呢?
...
如果你是用紫外光谱仪,那就得用溶剂先调零么?用酶标仪倒不需要
如果你是用紫外光谱仪,那就得用溶剂先调零么?用酶标仪倒不需要...
我也是用无水乙醇稀释的 但是稀释前测吸光度已经低于0.7了 不知道那里出了问题 您能不能把资料发给我借鉴一下呢?1464395144 万分感谢

楼主你的阳性对照是不是设置有误?
我查的文献是说PBS或者乙醇稀释比较好,水应该问题也不大,阳性对照没问题,溶剂加ABTS测试液。留个微信或者邮箱?资料可以发给你
请问你的样品,是用什么溶剂溶的呢?我的样品要用70%的乙醇溶,ABTS和过硫酸钾都是用水溶解的,用水稀释,我打算用水做参比和空白。这样行么?如果用无水乙醇稀释的话,我都不知道该用什么做参比了。
...
哈喽,请问你的问题解决了吗

请问楼主问题解决了吗?
解决了

请问楼主问题解决了吗?
拿无水乙醇稀释的,倍数太高了吧?还是参比没放好?我没出现过...
等一等 这个需要参比调零吗???我好像没看到过 用什么调零呢?

请问楼主是怎么解决的?我正要做这个实验呢,打算用水稀释,请问你的母液可以放置多久?用什么来稀释的?还有你的空白调零是怎么设置的呢?请楼主帮帮忙。。。
配置完避光放置12-14h左右,最好尽快使用,不超过3天。我是用无水乙醇稀释的,用测试样品的溶剂作为阴性对照,溶剂+ABTS测试液作为阳性对照
楼主你好 麻烦问下吸光度怎么调到0.7的...我稀释后吸光度为负数呢……
拿无水乙醇稀释的,倍数太高了吧?还是参比没放好?我没出现过
我配好的7.4mM的ABTS和2.6mM的过硫酸钾混匀4℃过夜后其氧化自由基工作液的吸光度只有0.1~0.2啊?不知道4度影响大不大,目前还没想清楚原因,求指导

楼主你好 麻烦问下吸光度怎么调到0.7的...我稀释后吸光度为负数呢……
拿无水乙醇稀释的,倍数太高了吧?还是参比没放好?我没出现过
楼主你好 麻烦问下吸光度怎么调到0.7的...我稀释后吸光度为负数呢……

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