层析柱的长度问题？

< >超赞9楼观点。

< >回13楼，6cm柱子似乎粗了点。按你所说的计算，共用90g硅胶，如果装成直径4cm*高23cm似乎更合适。这90g硅胶量，也许能分离比1g更多的你的混合物，试试吧。

我建议二次或三次乃至多次上柱子，因为你几个点都要，在实际操作中很难一次完全分离，可以先收纯几个然后分离纯化另几个；柱子高度最好高点，直径小点，增加理论塔板数，洗脱剂极性小点（是薄层板层析的80％左右）。加压应该和分离效果没关系，但流速快，接受时容易因来不及分开就将原本能分开的两物质又合到一起了。

< >装柱水平对分离效果的影响更大

< >长柱短柱，对不同样品效果不同

< >但我觉得对长短柱的选择，更多时候是出于一种习惯和偏爱

< >楼主可适当选择，短柱效率高！

< >一般来说你用的硅胶和你要得到的东西的比例大概在20－30，就能完全分开的

< >你的柱子，用到细硅胶会提高柱效；用的硅胶量大到90倍，也有点多。另外，每杯50 ml，有点多。当减少硅胶用量到合适的地步，每杯20～30 ml也许就足够了。这样洗脱剂总量应该还能减少。

< >推荐这个帖子，看看你的结果和计算值相符否？如果你对照你的结果和这个帖子，得出的结论对大家都有帮助。

< >http:///bbs/dispbbs.asp?boardid=43&id=39006&page=4

最近再用，学习一下

< >我的东西有几十克呢。貌似有人说柱的直径跟东西的量多少有关，柱的高度跟分离的难易有关，不知道对不对？

< >有三个点rf值很接近，tlc板上看勉强分得开，如果二次展开倒是可以分的比较好。我想用300－400目的硅胶，硅胶和样品的比例是不是得比较大？柱长10cm左右可以吗？

< >承蒙楼上各位的指导，报告下目前的实验过程。由于东西成分较多，为了降低分离难度，先用溶剂萃取法将tlc前面两个点的组分一起萃取出来，这样样品就分为两大组分。前两点rf值相差较大，轻松搞定。

< >以下是后三个rf值相近的点的分离：

< >硅胶300-400目（山东烟台），120度下烘半小时；采用内径6cm的柱子，氯仿湿法装柱，柱高10cm。柱子用三个柱体积氯仿走一遍，以提高填充密度。湿法上样，样品量1g，色带厚0.5cm。氯仿－甲醇加压梯度洗脱。加压采用鱼缸增氧泵，功率4.5w；流速大约5－10ml/min，视柱内溶剂高度而有所差别，每50ml接一瓶。花了1500ml的溶剂，终于把后三个组分分离开。

< >    请各位高手就以上的实验过程提提意见，以利改进。

[此贴子已经被作者于2006-12-9 1:14:41编辑过]

< >比300－400目的硅胶更细的，是薄层层析硅胶吗？

< >我之所以用这么粗的柱子，硅胶量这么大，主要是因为产品在洗脱剂中的溶解性很差，在走柱子的时候扩散很严重，为了尽量减少点的交叉，只好这样。如果要提高溶解性，可以加入较多的乙酸，但我的产品在乙酸中会分解（不过在氯仿这样的环境下貌似分解的比较慢），而且大量的乙酸给后处理和溶剂回收带来不少麻烦。如果用苯－二氯甲烷－乙醇体系效果会好一点，但老板不让我用苯，我也不想用。

< >50ml一瓶还好，因为溶解性差，所以50ml中溶不了多少样品，有交叉点的瓶数也没几瓶。就是感觉这样的效率太低了。据说真空液相层析法对分离量大的样品有优势，不知道合不合适？

< > 另外，版主提到的那篇帖子，我之前很仔细的研究过了。总体感觉还是比较接近实际的，不过对于扩散比较严重的样品，就不太好用了，呵呵。

[此贴子已经被作者于2006-12-10 22:51:16编辑过]

< >加压可以使硅胶颗粒间的间隙减小，均匀程度增加，增加柱效

< >但常压能分开时，最好不用加压，因为加压麻烦

< >另外，装柱对分离效果的影响更大

< >过柱子，如果是固体样品，拌样硅胶用1.2～1.5倍左右;如果是液体样品，用1.5～2倍左右硅胶拌样。

< >装柱硅胶用拌样硅胶的4～7倍左右，一般样品都可以分开。

< >以上是个人经验，仅供参考！

< >在满足径高比的条件下，越粗的柱子分离效率越高。 < >硅胶的总量和待分离物质的总量相关。依其分离难易程度不同，可用20倍～100倍重量比。这方面的讨论本论坛有很多，请搜索。如用“柱层析”作为关键词。

接受9楼观点，在实际应用中再度揣摩，不一样的样品分离时有一定的差别。

< >谢谢16楼的验证。

< >薄层层析硅胶，可用在柱层析上的h，具体是多少目我不知道，但印象中比400目细，而且目数更均匀，这样用同样的硅胶量会获得更高的塔版数。

< >至于样品溶解度的问题，如果在洗脱剂中溶解不好，造成湿法上样体积过大，可能会造成交叉现象，一般是通过加大硅胶用量解决。其实你的这个问题，还有一个解决方法，就是干法上样。选择最好溶解度的低沸点溶剂（甲醇、丙酮等），用尽量少的粗硅胶（1～3倍）拌样，这样就不会造成上样体积过大的问题了。

< >vlc，就是你说的真空液相层析，我也赞成将其用于rf值接近的样品的分离。其原理相当于薄层的多次展开。这个方法论坛里也多次讨论过。所用硅胶可以低至样品量的5～10倍，且有时可以分离tlc上部分交叉的点。但这个方法对装柱子有很高的要求，要装得非常结实、非常均匀才行。有很多人并不看好vlc，认为那是一个粗分工具。这就仁者见仁、智者见智了。

柱子的长短，要根据你样品的性质来定，首先，要能分开，在适当加快时间。

< >1、梯度洗脱即可，不必二次或三次上柱子。 < >2、柱子高、直径小，就可以增加塔板数了？你怎么看细柱子的边缘效应对分离的影响？ < >3、洗脱剂，我一般是降低极性一倍，而不是80％那么少。 < >4、流速适当的快，可以减轻柱子的横向扩散，因此合适的快流速（加压）是可以提高分离效果的；但过快的流速会因为样品与硅胶之间吸附-解吸附的不完全，造成效率下降。 < >5、“接受时分不开”和“原本能分开”是两回事，不能归罪于快流速。 < >关于柱子是粗些好还是细些好，一直都有争论。我还是这个观点：在满足径高比的情况下，短粗的柱子效果好于细长的。如果走柱子时能观察到色带，这个就很容易分辩：短粗的柱子，色带是一条平线；细长的柱子，色带是一个舌型，边缘效应非常明显。 < >以上与战友们探讨。

< >rf小，最好重选展开剂；

< >过柱子最好梯度淋洗；

< >柱子的长短与硅胶目数，柱子的径高比，淋洗速度甚至装柱方法等密切相关