组氨酸标签蛋白染色试剂盒是一种重要的分子生物学技术，被广泛应用于载体构建、基因改造和蛋白质功能研究等领域。与传统方法相比，该试剂盒无需使用单链DNA模板，从而避免了基因克隆到载体的繁琐过程。
组氨酸标签蛋白染色试剂盒通过荧光染色来特异地检测聚丙烯酰胺凝胶中含有组氨酸标签的蛋白。使用该试剂盒可以直接在凝胶上检测His标签融合蛋白的表达，无需进行转膜和蛋白免疫印迹。虽然最低检出限取决于紫外灯（300纳米）和检测仪器（最好是CCD照相机），但该试剂盒提供了一种方便的方法来评估组氨酸标签蛋白的表达量，并且与后续的考马斯染料和其他总蛋白染色方法兼容。
1. 比蛋白免疫印迹法快两到三倍，可以更快地得到结果并且节省研究时间。
2. 可直接在凝胶上检测，无需进行转膜和蛋白质免疫印迹，即可检测仅有0.2微克的6x组氨酸标签蛋白。
3. 即用，含有两种试剂配方，无需混合和稀释，确保了简单易行且无误的检测方法。
4. 用于单独、特异地检测6x组氨酸标签蛋白的荧光检测方法，可以检测到低丰度蛋白的CCD照相方法，以及检测大量标签蛋白的UV透射方法。
5. 与各种蓝色染色试剂兼容，可以特异染色6x组氨酸标签蛋白，并且可在此后利用蓝色染色试剂进行总蛋白染色。
该研究设计并合成了一种以聚撑苯乙炔为主链、在侧链中引入IDA的负电荷共轭聚电解质PPEIDA，并对其进行了详细研究。研究结果表明，金属离子在甲醇溶液中对PPEIDA的淬灭效率要高于在水溶液中，这为进一步利用PPEIDA与镍离子的络合物进行实验提供了可能。
通过FA和FRET实验证明了PPEIDA-Ni2+-His-Protein体系的可行性。在FA实验中，只有在有镍离子存在时，PPEIDA溶液与带有组氨酸标签的蛋白结合才会导致荧光各向异性的增加，镍离子或组氨酸标签的缺席都不能改变各向异性。在FRET实验中，只有在镍离子和组氨酸标签同时存在时，PPEIDA才能与组氨酸标签红色荧光蛋白发生荧光共振能量转移。FA和FRET实验证明了镍离子和组氨酸标签对于该体系的有效性。 该体系已成功应用于Western Blot实验，利用PPEIDA与镍离子络合物替代一抗和二抗对组氨酸标签蛋白进行成像，省去了繁复的步骤，并且不再依赖于专门的显影设备，从而节省了时间和成本。此外，该体系还成功应用于细胞成像，通过PPEIDA与镍离子络合物荧光成像Hela细胞表面的组氨酸标签蛋白。
[1] Ikuko Takahira, Hirokazu Fuchida, Shigekazu Tabata, Naoya Shindo, Shohei Uchinomiya, Itaru Hamachi, Akio Ojida. Design of a binuclear Ni（II）–iminodiacetic acid（IDA）complex for selective recognition and covalent labeling of His-tag fused proteins. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 2014(13).
[2] Kan-Yi Pu, Kai Li, Bin Liu. A Molecular Brush Approach to Enhance Quantum Yield and Suppress Nonspecific Interactions of Conjugated Polyelectrolyte for Targeted Far-Red/Near-Infrared Fluorescence Cell Imaging. Adv. Funct. Mater. 2010(17).
[3] Yan Liu, Katsu Ogawa, Kirk S. Schanze. Conjugated polyelectrolytes as fluorescent sensors. Journal of Photochemistry & Photobiology, C: Photochemistry Reviews. 2009(4).
[4] Steven Knecht, Daniel Ricklin, Alex N. Eberle, Beat Ernst. Oligohis-tags: mechanisms of binding to Ni2+-NTA surfaces. J. Mol. Recognit. 2009(4).
[5] 蔡恺. 亚氨基二乙酸修饰的共轭聚合物荧光标记组氨酸标签蛋白[D]. 清华大学, 2017.
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