东西扩不出来，求助啊？

有一个问题咨询一下，我想要表达一个鸡的受体蛋白，现在卡在第一步了。从文献上扒了几对引物，自己也设计了几对，效果都不理想。最后决定将预计大小的条带切胶回收后再扩了一轮，出现一条杂带，分别回收测序，结果都是一个什么细菌的序列。造成这种情况会是什么原因？怎么解决？谢谢~

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共10个回答

如果知道序列可以直接合成基因

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先设计对目标条带（200-300bp）短的引物，看看你的样本里面有没有你需要的核酸。

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你是从提组织RNA开始的吗？真核生物的基因克隆以cDNA为模板，如果得到的cDNA质量好的话，不会出现扩增不出来的情况。

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1000多，不大
...
如果引物没有问题，也有可能是酶的问题

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你的组织块清理不干净，有细菌残留

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如果知道序列可以直接合成基因
课题组穷啊，木有钱～

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如果引物没有问题，也有可能是酶的问题
...
手上有的mix都用过，效果都不大好

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序列多大，序列2K以上确实不太容易提
1000多，不大

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序列多大，序列2K以上确实不太容易提

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你的组织块清理不干净，有细菌残留
用的就是剖检病料，要除菌难度有点大～

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