通过分离提纯得到人参皂苷Rf是一项关键的研究工作，其可为人参皂苷的生产提供高纯度的产品。采用分离技术，如柱层析、液液萃取等方法，可以有效地从人参提取物中纯化得到目标化合物，为进一步研究和药物开发奠定坚实的基础。
简介：人参皂苷 Rf 是人参和日本参中发现的一种人参皂苷，是 3beta、6alpha、12beta 和 20 pro-S 位羟基取代的达玛烷，其中 6 位羟基已转化为相应的 beta-D-葡萄吡喃糖基-(1->2)-beta-D-葡萄吡喃苷，并在 24-25 位引入双键。它具有作为植物代谢物、细胞凋亡诱导剂和抗肿瘤剂的作用。它是一种 12beta-羟基类固醇、3beta-羟基类固醇、beta-D-葡萄糖苷、二糖衍生物、人参皂苷、四环三萜类化合物、20-羟基类固醇和 3beta-羟基-4，4-二甲基类固醇。它来源于达玛烷的氢化物。
1. 药理作用：
人参皂苷是我国传统名贵中药人参的主要活性成分，包含40多种皂苷单体，根据其化学结构，主要可分为人参二醇型和人参三醇型。
人参皂苷Rf是一种与糖有关的类固醇类化合物，仅存在于人参中且含量较低，然而其是脂质代谢的重要调节因子，并且已证明具有镇痛、抗炎以及神经保护作用。人参皂苷Rf通过降低脊髓和背根神经节中的促炎细胞因子IL-1β、IL-18、IL-6的水平，促进抗炎细胞因子IL-10的释放，恢复促炎细胞因子和抗炎细胞因子之间的平衡，来改善神经病理性疼痛的发展。在切口痛模型中，人参皂苷Rf减少了促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的释放，缓解了动物的痛觉过敏和痛觉超敏情况。最近的研究表明人参皂苷Rf通过NF-κB通路发挥了抗炎作用，从而产生镇痛效应。
2. 分离提纯：
李鹏飞等人以人参根须为原料，采用甲醇浸提法提取人参根须中总皂苷，再用硅胶柱层析法对总皂苷进行分离，可得到较纯净的人参皂苷单体Rf。结果表明，500 g人参根须中提取得到总皂苷20.5 g，提取率为4.10%。总皂苷中主要含Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd等成分。20.5 g人参根须总皂苷经硅胶柱层析法分离，得到较纯人参皂苷单体Rf 0.410 g，在总皂苷中的得率为2.00%，在人参根须中得率为0.082%。高效液相色谱法检测分离得到的人参皂苷单体Rf的纯度较高，为93.0%。具体实验操作如下：
（1）人参总皂苷的提取
将1 000 g人参根须粉碎后用甲醇反复浸泡3次，过夜，每次甲醇用量为6 L。合并浸提液浓缩干燥后用200 mL石油醚反复脱脂3次，脱脂后粉末溶解于适量去离子水中，然后用200 mL水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇层。水洗正丁醇层脱糖，最后将正丁醇层浓缩、干燥、收集、称重，得人参总皂苷。取少量干燥样品进行HPLC检测。
（2）硅胶柱层析法
制备样品胶:将分离所得人参总皂苷用甲醇和少量氯仿溶解，加入2.5倍样品质量的80~100目硅胶，水浴蒸干，将样品胶放入干燥皿中。
装柱:取20倍人参总皂苷样品质量的300~400目硅胶作为分离胶，用漏斗慢慢装入玻璃柱内，使其铺放均匀(其间抽实硅胶)，再装入样品胶，最后在最上层放置脱脂棉，装柱完成。
洗脱:用纯氯仿通柱，再用V(氯仿)∶V(甲醇)=8.5∶1.5的氯仿-甲醇洗脱液进行洗脱，待检测出Rf完全分离后将洗脱液配比换为V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(水)=7∶3∶0.5继续洗脱。最后收集洗脱液，浓缩，蒸干得固体粉末。
（3）薄层层析法(TLC)
分别取1 mg人参皂苷标准品及人参皂苷样品溶于1 mL甲醇中，制成人参皂苷溶液。将点好样品的薄层板放入层析缸中展开，展开剂配比为V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(水)=7∶2.5∶0.5，显色剂为10%硫酸。根据标准品对照即可确定样品中的皂苷成分。
（4）高效液相色谱法检测分离产品纯度
高效液相色谱，Waters 2695；色谱柱，Knauer(5 μm，250 mm×3 mm)；流动相A，乙腈；流动相B，水。配置样品质量分数为2%，用0.45 μm滤膜过滤后即得检测样品。柱温，35 ℃；进样量，10 μL；检测波长，203 nm；体积流量，0.6 mL/min。人参皂苷Rf的HPLC图谱如下图所示：
参考：
[1]文苾蕊,张志玲,陈乃宏. 人参皂苷Rf在疼痛治疗中的研究进展[C]// 中国药理学会补益药药理专业委员会. 第九届中国药理学会补益药药理专业委员会学术研讨会论文集. 湖南中医药大学药学院湖南省中药饮片标准化及功能工程技术研究中心;中国医学科学院药物研究所神经科学中心;, 2019: 1. DOI:10.26914/c.cnkihy.2019.070281.
[2]李鹏飞,何丹,鱼红闪,等. 人参皂苷Rf的分离提纯 [J]. 大连工业大学学报, 2011, 30 (03): 180-182.
[3]https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/441922
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