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如何提取人参皂苷Rb3? 1

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在现代医药领域中,人参皂苷Rb3作为一种重要的生物活性成分备受关注。其提取方法不仅对于研究人参的药用价值至关重要,同时也为开发新型药物提供了重要的参考。


简述:人参皂苷Rb3是五加科植物人参、西洋参、三七等的主要药理活性成分之一,主要存在于人参的根、花蕾、茎叶和西洋参的根、茎叶以及三七的茎叶中,人参皂苷Rb3的基本母核为达玛烷型四环三萜,属于原人参二醇型三萜皂苷。现代研究表明,人参皂苷Rb3具有广泛的生物学活性,具有广阔地开发应用前景。

提取:
1. 方法一

陆廷祥等人建立了三七叶总皂苷中人参皂苷Rb3的提取方法及含量测定方法。研究采用乙醇回流提取法、大孔树脂吸附法、离子交换法等提取三七叶总皂苷,HPLC法对三七叶总皂苷中人参皂苷Rb3进行定量分析,研究其质量标准

得到三七叶总皂苷产率为12%,人参皂苷Rb3的线性范围为(1.078~6.468)×10-3 mg,回归方程为Y=2.2717X+0.8629,r=0.9998;RSD为0.944%。人参皂苷Rb3的含量为11.17%>10%(2010年版《中国药典》规定≥10%)。该研究所用方法对三七叶总皂苷的提取率高,方法简单可行;采用HPLC检测其含量,专属性强,重现性好,准确度高。


2. 方法二

胡庆普等人优化现有三七地上部分三七花、茎叶的提取工艺,以便于开发三七花、茎叶的特色食品、保健食品、药品。研究通过不同三七花、茎叶的配比,采用L9(34)正交处理,检测所得三七花、茎叶提取总皂苷和人参皂苷Rb3含量、考察三七花、茎叶提取率,确定最佳提取工艺。

研究得到:三七花、茎叶(花、叶配比3∶7),添加1%的组合酶(纤维素酶、果胶酶配比1∶0.4),提取温度45℃,提取时间2h,滤液经絮凝、离心、脱色、过滤、冷冻干燥制得。三七花叶提取物总皂苷含量为80.5%、人参皂苷Rb3含量为20.58%,提取率为92.8%,溶解性好,色泽金黄,工艺简单易行,适于工业化生产和市场推广应用。


3. 方法三

孙成贺等人报道了一种采用模拟移动床制备西洋参果中人参皂苷Rb3的方法,具体如下:

3.1 大孔树脂处理、装柱

1)将2.5kg AB-8大孔树脂装入玻璃柱中,关闭下部出口,用3%HCl溶液浸泡处理4小时,打开下部出口,放出HCl溶液,用蒸馏水冲洗至中性;


2)关闭下部出口,用3%NaOH溶液浸泡处理3-4小时,打开下部出口,放出NaOH溶液,用蒸馏水冲洗至中性。


3.2 样品处理

1)将1.0kg西洋参果总皂苷粗提物溶解于蒸馏水中,从上部加入大孔树脂柱中,静止12小时;


2)分别用10个柱体积的蒸馏水,10个柱体积20%乙醇,10个柱体积75%乙醇分别洗脱,收取75%乙醇洗脱液;


3)将75%乙醇洗脱液用旋转蒸发仪在60℃以下回收乙醇,得浓缩液;


4)将浓缩液重复上柱1次,再用10个柱体积75%乙醇洗脱,用旋转蒸发仪在60℃以下回收乙醇,浓缩至稠浸膏;


5)用蒸馏水将浸膏全部溶解,移入分液漏斗中,加入5倍量乙酸乙酯萃取,收集水层备用;


6)水层用旋转蒸发仪浓缩成稠浸膏,再用甲醇溶解配制成1mg/mL样品溶液;


3.3 模拟移动床粗分段

1)模拟移动床设置成4柱串联模式,4根色谱柱为不锈钢柱ID·L=5cm×10cm,第一根色谱柱内填料为MCI(75μ~150μ),后三根色谱柱填料为ODS(20μ,100埃米)以20—80 mL/min流速,用80%甲醇溶液平衡15分钟;


2)将80mL样品溶液泵入模拟移动床中,同时以80%甲醇为洗脱剂,20ml/min流速洗脱,按体积分别接取洗脱部分,得1000ml组分1、400ml组分2、600ml组分3、500ml组分4、500ml组分5;


3)用旋转蒸发仪浓缩第3组分至浸膏,备用;


3.4 模拟移动床分离制备

1)设定模拟移动床参数为洗脱剂: V (甲醇)∶V (水) = 30—70∶70—30;模式:1-4-3;切换时间:10—500 s;洗脱流速:20—80 mL /min;萃取液流速:15—40 mL /m in;进样流速:3 mL /in;样品质量浓度:0. 2 g/mL;


2)将组分3用甲醇溶解后,泵入模拟移动床,进行洗脱;


3)产品E口流出Rb3后开始接洗脱组分,旋转蒸发仪浓缩,真空干燥得人参皂苷Rb3。


参考:

[1] 陆廷祥,王传明,邓莹,等. 三七叶总皂苷中人参皂苷Rb3优化提取[J]. 亚太传统医药,2017,13(13):29-31. DOI:10.11954/ytctyy.201713012.

[2] 郑梦梦,张锋,赵启韬. 人参皂苷Rb3的生物学活性研究进展[J]. 中南药学,2017,15(9):1249-1252. DOI:10.7539/j.issn.1672-2981.2017.09.017.

[3] 胡庆普,焦家良,付翠花,等. 三七地上部分提取总皂苷及人参皂苷Rb3工艺研究[J]. 光明中医,2019,34(5):701-703. DOI:10.3969/j.issn.1003-8914.2019.05.019.

[4] 中国农业科学院特产研究所. 采用模拟移动床制备西洋参果中人参皂苷Rb3的方法. 2014-12-10.

[5]https://www.mdpi.com/2223-7747/11/16/2152

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