制备人参皂苷Rh1是人参研究领域的一项重要工作，通过优化提取和纯化工艺，可以有效地从人参中获得高品质的人参皂苷Rh1，为其在医药领域的应用提供了可靠的基础。
简介：人参药用在我国已有数千年的历史，其具有多种生理和药理作用，如抗肿瘤、增强免疫、改善微循环、平稳血压、调节血糖、降血脂、安神、抗衰老、抗紧张、调节消化机能、预防消化道溃疡、提高生命质量、增强记忆及学习能力等。
目前公认人参皂苷是人参的有效部位，其中的Rg1作为有效成分之一，含量较高，活性强，作用广。但是，天然人参皂苷被肠道吸收的能力极差，难以入血发挥药效作用，从而影响了人参皂苷的新药开发及产业化。
近年研究表明，人和大鼠口服人参皂苷后，在人肠道内代谢途径为Rg1→Rh1→原人参三醇(Ppt)，在大鼠肠道内的代谢途径为：Rg1→Rh1/F1(ginsenoside F1)→原人参三醇(Ppt)。其中F1为Rh1的同分异构体。说明Rg1经肠内菌代谢后，两个中间产物(Rh1及F1)被吸收入血产生药理作用。
制备：
1. 方法一
（1）酸水解
将纯度大于80％的三醇组人参皂苷，加8倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸浓度达15％，将上述混合液置于水浴锅中，50℃水解7小时。
（2）脱酸
水解液冷却至室温，以DM130大孔吸附树脂柱层析脱酸。用水洗脱，流速8ml/min，至流出液为中性，用浓度为85％的乙醇洗脱，至薄层色谱检测无紫色斑点。
（3）富集
脱酸后的水解液浓缩，干燥，用68％的甲醇溶解，加入2倍量的硅胶拌样，挥去甲醇，干法装柱，硅胶柱层析分离，以氯仿∶甲醇∶水＝8∶2∶0.2为流动相，展开，洗脱。薄层层析跟踪检测，富集Rh1部位。
（4）纯化
上述富集得到的Rh1用中压柱层析进行分离纯化，层析材料为反相键合硅胶，用浓度为50％的甲醇等度洗脱，薄层层析跟踪检测，合并Rh1部位，减压浓缩，干燥，用高效液相色谱法检测人参皂苷Rh1的纯度，大于90％。
2. 方法二
（1）三七总皂苷的制备
取1 000 g的药材三七粉碎，加入7 000 mL 75%乙醇浸泡48 h，浸泡过程中适当搅拌，纱布、滤纸过滤后，收集浸出液，滤渣继续加入乙醇浸泡。同上法循环3次，将3次所得滤液合并，浓缩、干燥。将干燥粉末溶于1 000 mL的去离子水中，分别用400、300、300 mL石油醚分3次脱去其中的脂溶性成分，收集水相；然后用800、600、400 mL水饱和正丁醇分3次萃取三七总皂苷，收集正丁醇相，浓缩干燥。将干燥粉末溶于适量的去离子水中，经AB-8大孔吸附树脂柱反复吸附，8倍柱体积去离子水脱糖，6倍柱体积70%乙醇洗脱皂苷。收集皂苷洗脱液，采用D296大孔吸附树脂柱脱色，适量70%乙醇洗脱皂苷，直至TLC检测不再有皂苷流出，收集洗脱液，浓缩干燥，得三七总皂苷。
（2）硅胶层析分离人参皂苷Rh1
样品胶的制备:称取三七总皂苷25 g充分溶解于氯仿-甲醇[ V(氯仿)∶V(甲醇)=1∶1]的混合溶液中，取80~100目的硅胶65 g，缓慢倾倒于皂苷溶液中，于70~80 ℃水浴边加热边搅拌，使硅胶与皂苷溶液均匀混合，待溶剂挥发完全后即成样品胶。
装柱:将400 g 300~400目硅胶作为分离胶均匀装入柱中，真空泵抽气，使之均匀细密。在硅胶上层均匀平铺4 cm起缓冲作用的80~100目硅胶，最后在顶层加入样品胶，并在其表面铺上棉花层。装柱后，首先用纯氯仿通柱，然后用氯仿-甲醇[ V(氯仿)∶V(甲醇)=8.5∶1.5]混合液作为流动相洗脱，流出液每200 mL收集一次，TLC跟踪检测洗脱过程人参皂苷Rh1的流出情况。
（3）薄层层析(TLC)
采用薄层层析法检测人参皂苷Rh1。微量点样器吸取人参皂苷标准品及样品，点样于薄层层析板上。依照样品浓度确定点样量，每次点样均需风干再进行下一次点样。展开剂为氯仿-甲醇[ V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(水)=7∶2.5∶0.5]混合液。显色剂10% H2SO4水溶液，加热显色。
（4）高效液相色谱检测人参皂苷Rh1纯度
色谱仪，美国Waters 2695 Separations Module；检测器，美国Waters 2996 Photodiode Array Detector；色谱柱，C-18 Hypersil ODS2 5 μm (4.6 mm×150 mm)；工作温度，20 ℃；柱温，35 ℃；体积流量，1.0 mL/min；样品进样量，10 μL；检测波长，203 nm。
（5）结果
25 g三七总皂苷以氯仿-甲醇溶液[V(氯仿)∶V(甲醇)=8.5∶1.5]作为流动相洗脱，经硅胶层析得人参皂苷Rh1单体0.36 g，得率为1.44%，高效液相色谱检测其纯度为66.08%。人参皂苷Rh1的纯度鉴定如下图：
参考：
[1] 李龙华,富瑶瑶,石岭,等. 三七中人参皂苷Rh1的分离与纯化[J]. 大连工业大学学报,2011,30(1):23-25. DOI:10.3969/j.issn.1674-1404.2011.01.006.
[2] 玉溪市维和生物技术有限责任公司. 人参皂苷Rh1的制备方法. 2010-03-17.
[3] 海口绿科南药研究开发有限公司. 人参皂苷Rh1的医药用途. 2006-12-27.
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