达比加群是一种常见的药物，广泛应用于心脑血管疾病的治疗中。本文将重点探讨如何准确测定血浆中的达比加群，为临床监测和个体化用药提供可靠依据。
简介：达比加群(dabigatran)是最前沿的新一 代口服、高选择性、可竞争的、可逆的直接凝血酶抑制剂(DTIs)。其竞争性结合凝血酶与纤维蛋白的结合位点，阻止纤维蛋白原裂解为纤维蛋白，从而阻断了凝血瀑布网络的最后步骤及血栓形 成，可提供有效的、可预测的、稳定的抗凝效果，同时较少发生药物相互作用。
但是达比加群为强极性的两性离子且有疏水性侧链，口服给药后的生物利用度较低，平均为6．5%，需要以酯性前药形式服用以提高生物利用度。达比加群通过成酯方式修饰达比加群的羧基和胺基得到达比加群酯(dabigatran etexilate)作为前体药物，但未显示有任何药理学活性。口服后在胃和小肠吸收迅速，经血液和门静脉进入肝脏，即可被肝脏酯酶快速水解，成为其活性形式-达比加群，其并不需通过肝细胞色素P450酶代谢，因此与其他依赖P450酶系统的药物相互作用小。达比加群是达比加群酯口服给药后在血浆中的主要暴露形式，其暴露程度可以直接反映药物的生物活性。因此，研究建立准确测定血浆 中达比加群的参数是达比加群酯的药代动力学、临床监测的基础。
1. 高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中的达比加群
韩舒等人建立了一种简单、快速、灵敏的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠血浆中达比加群的浓度，进行了系统的方法学验证研究，并应用于达比加群酯大鼠灌胃给药后的药代动力学研究。方法:血浆样品经甲醇沉淀蛋白后，通过Ecosil-C18 (150 mm×4．6 mm，5μm)色谱柱分离，流动相为甲醇-5%甲醇水溶液(含有 10 mmol/L甲酸铵及0．1%甲酸)，梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子化源正离子条件下多反应监测模式，监测反应离子对为达比加群［M+H］+m/z 4 72．2→289．2，内标苯海拉明［M+H］+m/z 256．1→167．0。结果:达比加群在0．25～ 500 ng/m L浓度范围内线性关系良好(r= 0．9970)，定量下限为0．25 ng/m L;日内、日间精密度(ＲSD)均小于9．57%，准确度(ＲE)均在± 6．5%以内;血浆中无内源性物质干扰，基质效应为108%～112%，提取回收率为92．6%～ 94．2%;达比加群的血浆样品经室温放置4 h、－ 80℃三次冻融循环、－80℃冻存三周，处理后的样品在进样器内放置24 h均稳定;药物浓度超出曲线范围的样品经空白血浆稀释5倍后，其准确度均在±8．00%以内，精密度小于4．92%。建立的LC-MS/MS方法学验证，成功适用于大鼠灌胃20 mg/kg给药达比加群酯药代动力学研究。
2. UPLC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中达比加群
向志雄等人建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定Beagle犬血浆中的达比加群。以达比加群-d3为内标，使用BEH C18 色谱柱，采用ESI离子源，多反应监测(MRM)模式进行正离子检测。达比加群的线性范围为1～1 000 ng/ml。日内、日间RSD 均小于15％。同时测定了服用甲磺酸达比加群酯胶囊后Beagle犬的血药浓度，其主要药动学参数分别为 ：tmax (1.8±0.3) h， cmax (113.8±65.0) ng·ml-1，AUC0 →t (657.4±340.8) ng·h·ml-1，AUC0 →∞ (716.5±397.8) ng·h·ml-1，MRT (8.7±2.2) h，t1/2(5.9±1.9)h。以甲 醇∶水(10∶90，含0.5％甲酸)为沉淀试剂时， 提取回收率高且提取稳定。
参考文献：
[1]韩舒,谷元,张爱杰等.高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中的达比加群[J].中国临床药理学与治疗学,2015,20(12):1354-1359+1372.
[2]向志雄,马文狄,夏广新.Beagle犬血浆中达比加群的UPLC-MS/MS法测定[J].中国医药工业杂志,2015,46(10):1096-1099.DOI:10.16522/j.cnki.cjph.2015.10.012.
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