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鼠李糖脂的鉴定与定量检测?

求助各位前辈,有没有做过铜绿假单胞菌产鼠李糖脂的相关实验呀?鼠李糖脂的定量检测方法你们用什么方法?求指导啊我之前用蒽酮硫酸法,可是这个方法稳定性很差
具体步骤:
(1)粗提 1.取5ml发酵液,8000r/min,15min,取上清液
                 2.上清液用6mol/L HCl调pH至2.0,4℃冰箱过夜
                 3.10000r/min 15min 收集沉淀(粗产品)
(2)蒽酮硫酸法定量检测
1.蒽酮试剂配制:取0.2g蒽酮溶于100ml 85%硫酸中
2.用试管加1ml甲醇溶解(1)中获得的粗产品,于冰水浴中加入硫酸-蒽酮试剂4ml,完全混合,加1ml去离子水,完全混合,然后浸于沸水浴中10min后(此时溶液变成了深墨绿色)取出,用冰水迅速冷却。
3.取上述溶液1ml于50ml比色皿中稀释至50倍,溶液是淡黄色,可是有少量白色絮状物(稳定性不好的主要原因?)
4.使用紫外分光光度计于波长为637nm处测吸光度。
扫描过3中的溶液,200-800nm全波长扫描均未见吸收峰。查文献说全波长扫描:鼠李糖在可见光区应该有吸收峰,480nm、620nm均有人提及,为什么我没有扫出来吸收峰?跪求指教。最近遇到这个难题毕业论文进行不下去了
有人用过液相色谱法测鼠李糖脂含量吗?求方法,最近我也在看这个方法呢
跪求指教,万分感谢
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共11个回答
请问您用的空白对照是蒸馏水吗?我最近也在做发酵液中鼠李糖脂的检测,用的是苯酚硫酸法,但是我的空白组颜色比实验组深,测出来的是负值,读数还一直跳动,所以想问问您这个方法咋样!

我也不知道,我不测这个含量。你要测含量的话,是不是得买纯的鼠李糖脂做标样?
...
对呀,已经有了,可是测不出来。标曲都测不好
我也做不下去了,我主要做碳源的

我没有定量测量过,鼠李糖脂发酵出来是个混合物,有双糖单糖。你是测的总共的吗

我没有定量测量过,鼠李糖脂发酵出来是个混合物,有双糖单糖。你是测的总共的吗
对,测总共的,网上很多人用硫酸蒽酮法测,可是由于有沉淀稳定性太差。同一管液体连续测两次会差别很大,我都不知道怎么搞。。
对呀,已经有了,可是测不出来。标曲都测不好...
那我就帮不了你了,我不测含量的。鼠李糖脂的标样是不是很贵??

那我就帮不了你了,我不测含量的。鼠李糖脂的标样是不是很贵??
...
是呀,很贵的。700块很少一瓶
HPLC测过鼠李糖,鼠李糖酯是啥结构呢

我也是发酵鼠李糖脂的,同行

对,测总共的,网上很多人用硫酸蒽酮法测,可是由于有沉淀稳定性太差。同一管液体连续测两次会差别很大,我都不知道怎么搞。。...
我也不知道,我不测这个含量。你要测含量的话,是不是得买纯的鼠李糖脂做标样?

我也是发酵鼠李糖脂的,同行
那你用什么方法定量测定鼠李糖脂的?我们交流一下呗
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