求助各位前辈,有没有做过铜绿假单胞菌产鼠李糖脂的相关实验呀?鼠李糖脂的定量检测方法你们用什么方法?求指导啊我之前用蒽酮硫酸法,可是这个方法稳定性很差
具体步骤:
(1)粗提 1.取5ml发酵液,8000r/min,15min,取上清液
2.上清液用6mol/L HCl调pH至2.0,4℃冰箱过夜
3.10000r/min 15min 收集沉淀(粗产品)
(2)蒽酮硫酸法定量检测
1.蒽酮试剂配制:取0.2g蒽酮溶于100ml 85%硫酸中
2.用试管加1ml甲醇溶解(1)中获得的粗产品,于冰水浴中加入硫酸-蒽酮试剂4ml,完全混合,加1ml
去离子水,完全混合,然后浸于沸水浴中10min后(此时溶液变成了深墨绿色)取出,用冰水迅速冷却。
3.取上述溶液1ml于50ml比色皿中稀释至50倍,溶液是淡黄色,可是有少量白色絮状物(稳定性不好的主要原因?)
4.使用
紫外分光光度计于波长为637nm处测吸光度。
扫描过3中的溶液,200-800nm全波长扫描均未见吸收峰。查文献说全波长扫描:鼠李糖在可见光区应该有吸收峰,480nm、620nm均有人提及,为什么我没有扫出来吸收峰?跪求指教。最近遇到这个难题毕业论文进行不下去了
有人用过
液相色谱法测鼠李糖脂含量吗?求方法,最近我也在看这个方法呢
跪求指教,万分感谢