兔抗马多克隆抗体的应用及其原理？ ¹

背景^[1-3]

兔抗马多克隆抗体是一种能够特异性结合马IgG的多克隆抗体，广泛应用于Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验中。

检测原理：采用双抗体夹心法来测定样本中马IgG的水平。首先，在微孔板上包被纯化的马IgG抗体，形成固相抗体。然后，依次加入马IgG样品和标记有HRP的马IgG抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过充分洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化为蓝色，经酸处理后转化为最终的黄色。颜色的深浅与样品中马IgG的浓度呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），根据标准曲线计算样品中马IgG的浓度。

抗原通常由多个抗原决定簇组成，当一个抗原决定簇刺激机体时，由一个B淋巴细胞产生的抗体称为单克隆抗体（Monoclonal Antibody）。

当多个抗原决定簇刺激机体时，会产生多种不同的单克隆抗体，这些单克隆抗体混合在一起就形成了多克隆抗体。机体产生的抗体除了抗原决定簇的多样性外，还可以产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。

抗原刺激机体后，机体的浆细胞会合成并分泌一组与抗原特异性结合的免疫球蛋白，这就是抗体。

应用^[4][5]

兔抗马多克隆抗体在基于IgG物种特异性的家畜鲜肉真实性鉴定中的可行性研究

畜禽鲜肉及生肉制品的掺假和冒充现象普遍存在，目前还没有非常成熟、可靠、廉价且适用于现场检验和商业化开发的鉴别畜禽肉掺假和冒充的方法。免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）是一种存在于血液和组织液中物种特异性较强的蛋白质。

目前关于以IgG为目标抗原进行肉品物种鉴定的研究报道较少。本研究以IgG为目标抗原，利用免疫琼脂糖凝胶双扩散试验来鉴定牛羊肉中是否掺入马肉、猪肉或鸭肉；同时观察评价抗IgG血清的交叉反应性，即其物种特异性，并探索避免交叉反应的策略；评估掺假肉的检出限和结果的重现性，以验证以IgG为目标抗原建立免疫学方法鉴别家畜肉真实性的可行性。

研究结果显示，除了兔抗鸭IgG血清外，兔抗马IgG血清和兔抗猪IgG血清与牛和绵羊IgG或肉浸出汁存在一定的交叉反应。通过适当稀释抗血清可以避免交叉反应的发生。山羊抗马IgG血清和山羊抗猪IgG血清与牛、绵羊和骆驼IgG或肉浸出汁没有交叉反应。这表明使用与牛羊同科的山羊制备目标IgG抗血清可以避免与牛羊IgG的交叉反应。

参考文献

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[2] Nicola Giaretta, Antonella M.A.Di Giuseppe, Martina Lippert, Augusto Parente, Antimo Di Maro. Myoglobin as marker in meat adulteration: A UPLC method for determining the presence of pork meat in raw beef burger. Food Chemistry. 2013(3).

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[5] 乌恩其. 基于IgG物种特异性的家畜鲜肉真实性鉴定可行性研究. 内蒙古农业大学, 2019.