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如何制备多克隆抗体并纯化? 1

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当机体受到抗原刺激后,会产生抗体。抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇,而不同抗原分子具有多个抗原决定簇。因此,免疫动物产生的抗血清实际上是多种抗体的混合物。一种蛋白质激素的表面存在多个不同的抗原决定簇,可以与B淋巴细胞表面的相应受体结合。一个B淋巴细胞表面只能与一个抗原决定簇结合。当一个静止的B细胞与抗原决定簇结合后,就会被活化并增殖和分化为一群合成和分泌抗相应抗原决定簇抗体的浆细胞,这一群细胞被称为一个克隆。经典动物免疫法得到的抗血清中含有多种由不同克隆产生的、抗不同抗原决定簇的抗体,称为PCAb。自身免疫性内分泌疾病患者血清中存在的抗某一自身抗原(例如甲状腺过氧化物酶)的抗体,也可以具有多克隆性质,也可称为多克隆抗体。

为了制备多克隆抗体,可以利用间接还原胺化法制备亲和层析柱,并优化反应条件。可以使用高氯酸沉淀、离子交换和亲和层析等方法从人血清中纯化抗原,制备兔源多克隆抗体。常规兔源多克隆抗体制备包括以下几个步骤:多肽设计与合成、原核蛋白制备(包括c     DNA合成、载体构建、蛋白表达和纯化等)、免疫阶段(包括ELISA检测等)、纯化与检测(包括亲和纯化和特异性亲和纯化等)。

主要参考资料

[1]中华医学百科大辞海

[2]现代药学名词手册

[3]自制肝素亲和柱分离纯化载脂蛋白H及其抗体制备与鉴

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