多克隆抗体制备服务及其应用？ ¹

多克隆抗体制备服务是一项技术服务，根据需求制备多克隆抗体。该服务使用SPF级兔、大鼠、小鼠和豚鼠等免疫物种。多克隆抗体制备可以使用小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白等作为抗原。制备的多克隆抗体可用于Western Blot、ELISA和IHC等多种应用。

抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇，多克隆抗体能够识别多个抗原表位。由于具有可识别多个表位、可引起凝集反应、沉淀反应等优点，多克隆抗体被广泛应用于免疫学诊断领域。

多克隆抗体制备服务流程

1. 提供抗原，要求纯度>85%，浓度>0.5 mg/mL，至少1.5 mg。

2. 免疫2只FPS动物，共进行3次免疫。

3. 采集1mL免疫前血清，作为阴性对照。

4. 采集免疫后2只FPS动物的多抗血清，分别进行ELISA效价检测试验。

5. 提供ELISA检测报告和1mL免疫前血清。

多克隆抗体在人EGFL6研究中的应用

通过克隆EGFL6全长及片段基因，构建pET32a（+）-EGFL6全长及片段蛋白原核表达载体，诱导表达并鉴定全长EGFL6蛋白及片段蛋白，并利用EGFL6片段蛋白免疫制备抗EGFL6多克隆抗体，应用其检测人肿瘤细胞系中EGFL6全长蛋白，为深入研究EGFL6的相关功能奠定了基础。

方法：

1. 克隆EGFL6全长基因并进行原核表达，通过PCR扩增EGFL6全长基因，将其连接到表达载体pET32a（+）上，诱导表达并通过SDS-PAGE和Western blot检测和鉴定目的蛋白的表达。

2. 检测肿瘤细胞株中EGFL6的表达，提取总RNA，反转录成cDNA后，利用实时荧光定量PCR方法检测EGFL6基因的表达水平。

3. 克隆和表达肿瘤细胞株中EGFL6基因片段，通过PCR扩增EGFL6片段基因，将其连接到表达载体pET32a（+）上，诱导表达并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达。

4. 纯化EGFL6片段蛋白并制备抗EGFL6的多克隆抗体，利用镍离子亲和树脂进行纯化，以纯化产物免疫昆明小鼠制备抗EGFL6的多克隆抗体，该多克隆抗体经沉淀和纯化后，用于对肿瘤细胞裂解物进行Western blot检测分析。

参考文献

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