ANTI-HISTONE H3(PHOSPHO T118)抗体的应用及检测原理？ ¹

ANTI-HISTONE H3(PHOSPHO T118)抗体是一种多克隆抗体，能够特异性结合HISTONE H3(PHOSPHO T118)，广泛应用于多种免疫学实验，如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。

检测原理：采用双抗体夹心法测定标本中HISTONE H3(PHOSPHO T118)的水平。首先，将纯化的HISTONE H3(PHOSPHO T118)抗体包被在微孔板上，形成固相抗体。然后，依次加入HISTONE H3(PHOSPHO T118)和HRP标记的HISTONE H3(PHOSPHO T118)抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，最终转化成黄色。颜色的深浅与样品中的HISTONE H3(PHOSPHO T118)浓度呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），可以计算样品中HISTONE H3(PHOSPHO T118)的浓度。

组蛋白（histone）是真核生物细胞核中与DNA结合存在的碱性蛋白质的总称，分子量约为10000～20000Kda。

真核生物体细胞染色质中的碱性蛋白质主要分为5类，其中H2A、H2B、H3、H4的氨基酸序列在亲缘关系较远的种属中非常相似。而H1的氨基酸序列变化较大，在某些组织中，H1被特殊的组蛋白所取代。

ANTI-HISTONE H3(PHOSPHO T118)抗体在PI3K/AKT和MEK/ERK通路调控H3K27me3甲基化酶和去甲基化酶基因表达研究中的应用

以小鼠成肌细胞C2C12为研究材料，采用免疫印迹、染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，CHIP)、定量PCR（Q-PCR）的方法研究PI3K/AKT信号通路在成肌细胞分化阶段对组蛋白H3K27甲基化酶EZH1/EZH2和去甲基化酶UTX/JMJD3的表达调控。此外，在多种肿瘤组织中检测到EZH2存在过表达的现象，UTX和JMJD3也被检测到发生突变或者表达下降。MEK/ERK信号通路是生物体内广泛存在的一条信号通路，参与调控细胞的生长、增殖、分化和凋亡等生命过程。

在某些癌症细胞中，MER/ERK信号通路参与调控EZH2基因的表达。为了进一步研究这条通路对组蛋白甲基化酶和去甲基化酶的调控。我们以C2C12、C127、NIH3T3、HEPA1-61-6、RD五种细胞系为研究对象，用RT-PCR和Western-Bloting方法分析检测MER-ERK信号通路对组蛋白H3K27甲基化酶EZH2/EZH1基因和去甲基化酶UTX/JMJD3基因的表达。

实验结果显示，成肌细胞分化过程中磷酸化的AKT逐渐升高，EZH1和JMJD3蛋白表达变化不明显，EZH2蛋白表达降低，到第6和第7天蛋白降到最低值，UTX蛋白表达升高。

在成肌细胞分化过程中，经过PI3K/AKT信号通路激活剂处理24小时后，Myogenin和MCK蛋白表达升高，H3K27me3在Myogenin基因启动子区和MCK基因启动子及增强子区的富集与对照组相比降低。

参考文献

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[5]李晶.PI3K/AKT和MEK/ERK通路调控H3K27me3甲基化酶和去甲基化酶基因表达的研究[D].石河子大学,2013.