本文将讲述如何制备双氢青蒿素纳米粒，为提升DHA的水溶性、延长半衰期和增强抗肿瘤活性，实现DHA肿瘤细胞靶向递送提供参考思路。
简介：双氢青蒿素的英文名称为 Dihydroartemisinin(DHA)，是我国医药市场上的一种典型的处方药，化学式为C15H24O5，标准命名为(3R，5aS，6R，8aS，9R，12S，12aR)-八氢-3，6，9-三甲基-3，12-桥氧-12H-吡喃并［4，3-j］-1，2-苯并二氧七环-10(3H)-醇，CAS 号为 81496-81-3；71939-50-9；123930-80-3。药理上，人通过口服双氢青蒿素，1.33 h 血药浓度达到峰值，它的体内作用方式是通过其内过氧化物(双氧)桥，经血红蛋白分解后产生的游离铁所介导，产生不稳定的有机自由基或其他亲电子的中介物，然后与疟原虫的蛋白质形成共价加合物，而使疟原虫死亡，同时它具有轻微的生殖毒害。
纳米粒的合成：
自组装纳米粒在药物抗肿瘤方面被广泛应用，通过简单的包装方式便可能实现纳米粒的高载药能力，它可降低使用纳米载体合成纳米粒的复杂性，规避了因纳米载体引起的不利于递送药物的副作用。DHA 存在水溶性差、体内代谢快速、非特异性细胞毒素等问题。纳米药物递送系统作为一种新型给药方式，可通过多种纳米粒实现靶向治疗，并改善药物的溶解性和半衰期短等问题。
1. 多西紫杉醇- 双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒
为发挥多西紫杉醇（DTX）与双氢青蒿素（DHA）协同抗肿瘤效果，李宁等人设计了以肿瘤内环境还原响应的二硫键为连接臂的多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药，通过纳米沉淀法制备成自组装纳米粒，具体步骤如下
（1）DTX-S-S-DHA
取二硫代二丙酸（200 mg，1.96 mmol），精密称定，置于 100 ml 茄形瓶中，加入3 ml 乙酸酐于 30 ℃条件下反应 3 h，适量甲苯旋蒸出去过量乙酸酐。取 DHA（90 mg，0.32 mmol）及 DMAP（3.8 mg，0.03 mmol）精密称定，适量二氯甲烷溶解，加入上述反应瓶中，于 35 ℃条件下反应 24 h，TLC 监测反应进程（展开剂为环己烷：乙酸乙酯：冰乙酸=3:1.5:0.1）。硅胶柱层析（254 nm 紫外灯下 R f 值鉴于 0.4-0.6 之间），对产物进行分离纯化得淡黄色粘稠固体产物 1（S-S-DHA）。取产物 1（200 mg，0.42 mmol），NHS（29.5 mg，0.50 mmol）、EDC（49.2 mg，0.50 mmol），精密称定，加入 TEA 3 滴及适量二氯甲烷溶解，在 0 ℃条件下反应 1 h，加入 DTX（172.8 mg，0.21mmol）于 30 ℃反应 24 h。TLC 监测反应（展开剂：环己烷：乙酸乙酯：冰乙酸=1:1:0.1）。反应结束后，进行硅胶柱层析（254 nm 紫外灯下 Rf值鉴于 0.6 左右的强吸收带），收集目标组分的洗脱液，将其真空旋干，获得淡黄色粘稠液体终产物 2（DTX-S-S-DHA）。合成路线见图。
（2）多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的制备
采用纳米沉淀法 制备 DTX-S-S-DHA 自组装纳米粒，具体操作过程为：取
DTX-S-S-DHA 10.0 mg，精密称定，置于 2.5 ml EP 管中，加入提前配制好的含有 10 %TPGS 的无水乙醇溶液适量使溶解，将其配制成为一定浓度的 DTX-S-S-DHA 无水乙醇溶液，在一定制备温度及搅拌速度下，缓慢加入到纯化水中使其自组装成为 DTX-S-S-DHA 自组装纳米粒溶液（DSDNs）。
2. 十八胺修饰的双氢青蒿素前药自组装纳米粒
王蓉蓉等人通过纳米沉淀法制备 1 种以二硫代二丙酸为连接臂、十八胺为载体的双氢青蒿素 (DHA) 前药自组装纳米粒 (C18 -SS-DHA NPs)。制备得到的 C18 -SS-DHANPs 呈类球形，粒度分布均匀，平均粒径、多分散系数 (PDI)、ζ 电位、包封率和载药量分别为 (117.4±1.8)nm、0.20±0.02、(-23.9±1.1)mV、(97.37±0.09)％和 (81.14±0.08)％。C18 -SS-DHA NPs 在 4 ℃贮存 35 d，粒径及 PDI 无明显变化。合成路线如下：
3. 自组装双氢青蒿素纳米药物的制备
通过制备自组装双氢青蒿素纳米粒(Self-assembled Dihydroartemisinin Nanoparticles，DHA NPs)，可达到提升DHA的水溶性、延长半衰期和增强抗肿瘤活性，实现DHA肿瘤细胞靶向递送，减少纳米载体对细胞的毒作用目的。史乃元等人报道了自组装双氢青蒿素纳米药物的制备方法，具体如下：
分别称取 DHA（3 mg）和泊洛沙姆（Pluronic F-127）15 mg，将混合物共同溶于 5 mL 的 N，N’-二甲基甲酰胺（N，N’-Dimethylformamide， DMF）中，随后通过超声波振荡器超声使混合物充分溶解，将混合溶液缓慢加入 10 mL 去离子水中，搅拌过夜，离心机 5000 r/min，5 min，将上清液置于透析袋（Mw 截留值：3.5 kDa）中，用去离子水透析 24 h，即可获得 DHA NPs。
4. 阿霉素-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒
为了更好的发挥阿霉素(doxorubicin，DOX)的抗肿瘤作用，降低阿霉素耐药率，减小阿霉素的毒副作用，段丹昱将联合用药治疗的思路引入双氢青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)，分别合成了以二硫代二丙酸和丁二酸酐为连接臂的阿霉素-双氢青蒿素偶联前药(doxorubicin-dihydroartemisinin conjugated prodrug)DOX-SS-DHA和DOX-DHA。即通过纳米沉淀法制备两种阿霉素-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒(DOX-SS-DHA NPs和DOX-DHA NPs)，
两种制剂外观均呈球形或者类球形，粒径分布均匀，具有较高的EE及DL，于4℃保存20 d内粒径可以保持稳定。DOX-SS-DHA NPs的体外释放具有GSH还原响应，在一定浓度GSH下，可以更快更多的释放出DOX-SH和DHA。而DOX-DHA NPs没有GSH响应释放性能，但具有一定的缓释特性。
参考文献：
[1]史乃元. 自组装双氢青蒿素纳米药物的制备及其抗肝癌作用[D]. 延边大学, 2022. DOI:10.27439/d.cnki.gybdu.2022.000089.
[2]段丹昱. 两种阿霉素-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的制备及抗肿瘤药效学评价[D]. 山西医科大学, 2022. DOI:10.27288/d.cnki.gsxyu.2022.000675.
[3]李宁. 多西紫杉醇—双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的构建与抗肿瘤活性评价[D]. 山西医科大学, 2020. DOI:10.27288/d.cnki.gsxyu.2020.000095.
[4]王蓉蓉,任国莲,王锐利等. 十八胺修饰的双氢青蒿素前药自组装纳米粒的制备及其抗疟活性评价 [J]. 中国医药工业杂志, 2019, 50 (10): 1201-1207. DOI:10.16522/j.cnki.cjph.2019.10.013.
[5]龙威,黄银飞. 密度泛函方法研究双氢青蒿素的分子光谱与药物活性 [J]. 首都师范大学学报(自然科学版), 2017, 38 (01): 39-48. DOI:10.19789/j.1004-9398.2017.01.009.
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