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虾碱性磷酸酶的特性及应用? 1

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虾碱性磷酸酶是一种能够催化各种含磷化合物水解的酶类。根据其最适pH特性,可以分为酸性磷酸酶和碱性磷酸酶两类。磷酸酶在动物体内具有重要的生理功能,是解毒体系的重要组成部分,并在骨化过程以及磷化物和其他营养物质的消化、吸收和转运中发挥重要作用。虾碱性磷酸酶可以催化DNA和RNA的去磷酸化反应,也可以水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸。该酶在分子生物学研究中应用广泛,如去除DNA和RNA末端的磷酸基团,用于后续的克隆和探针末端标记。此外,虾碱性磷酸酶还可以用于降解PCR反应中的游离dNTP,制备测序模板和SNP分析。

组分

应用

虾碱性磷酸酶主要应用于以下方面:

  • 去磷酸化DNA和RNA
  • 防止克隆载体的自连
  • 制备5'末端标记模板
  • 去除PCR产物中的dNTP和焦磷酸盐

活性定义

活性定义为在25℃条件下,30分钟内能使1μg经HindIII消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制超过95%的DNA再连接。

储存

虾碱性磷酸酶可在-20℃保存3年。

使用注意事项

在使用虾碱性磷酸酶时,请注意以下事项:

  1. 使用1×SAP缓冲液进行反应
  2. 热失活时,将酶加热至65℃并保持5分钟,此过程是不可逆的失活
  3. 虾碱性磷酸酶可用于降解PCR反应中的游离dNTP,制备测序模板和SNP分析,无需纯化即可直接用于下游实验

主要参考文献

[1] 何海琪, 孙凤. 中国对虾酸性和碱性磷酸酶的特性研究[D]. , 1992.

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