尿嘧啶-DNA糖基酶的作用机理及应用？ ¹

尿嘧啶DNA糖基酶（Uracil-DNA Glycosylase，UDG）是一种重要的酶，可在含有尿嘧啶的DNA中产生脱嘧啶的位点。它主要应用于防止PCR扩增产物的污染，可以有效消除PCR产物的残留污染，保证扩增的特异性和准确性。此外，UDG还可以用于PCR交叉污染控制、糖激酶介导的单核苷酸多态性检测、位点特异性突变等多个领域的研究。

单位定义

在37°C，60分钟内从含有尿嘧啶的DNA模板中释放1 nmol尿嘧啶所需要的酶量定义为1 U。

10×Reaction Buffer

200 mM Tris-HCl (pH 8.2，25°C)，10 mM EDTA，100 mM NaCl。

保存缓冲液

30 mM HEPES-KOH (pH7.5)，150 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM DTT，0.05% (v/v) Tween 20，50% (v/v) 甘油。

质量控制

无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。

用途

UDG在PCR交叉污染控制、糖激酶介导的单核苷酸多态性检测(GMPD)、位点特异性突变、蛋白-DNA相关作用研究用探针、SNP基因分型、PCR产物克隆、PCR产物和cDNA中产生单链突出末端等方面具有重要的应用价值。

抑制和失活

抑制剂：Baccillus subtilis噬菌体PBS2来源的Ugi蛋白；Baccillus subtilis噬菌体phi29来源的p56蛋白。

失活：95°C加热10分钟。当温度低于55°C时，酶活性部分还原。因此PCR扩增后，PCR产物冰浴后可直接上样凝胶电泳。

备注

UDG在DNA中产生无碱基位点，加热、碱处理、内切核酸酶（特异性切割无碱基位点）可在该无碱基位点切割。UDG发挥活性不受二价阳离子影响。

主要参考文献

[1] 丁东, 熊云, 方勇新, 等. WSSV和IHHNV对虾病毒的胶体金免疫层析快速检测[J]. 水产养殖, 2014, 35(10): 1-7.