如何使用小鼠外周血单核细胞分离液试剂盒进行细胞分离? ¹

小鼠外周血单核细胞分离液试剂盒是一种用于分离小鼠外周血单核细胞的试剂盒。该试剂盒采用Percoll非连续性密度梯度离心法进行细胞分离，利用细胞间密度的差异来实现分离。这种方法操作简便，只需使用常规的实验设备即可完成。

单核细胞是血液中最大的血细胞，也是机体防御系统的重要组成部分。它们来源于骨髓中的造血干细胞，并在骨髓中发育。当它们从骨髓进入血液时，仍然是尚未成熟的细胞。单核细胞具有明显的变形运动能力，能够吞噬、清除受伤、衰老的细胞及其碎片。

如何进行细胞分离？

1. 在10ml或15ml玻璃离心管中依次小心加入A、D两种液体各2ml，制成梯度界面，确保各液面分层清晰。

2. 取1ml肝素抗凝血与全血及组织匀浆稀释液（或胎牛血清或人血清悬起匀浆的细胞1X107/ml）1：1混合后，重叠于D液上。以1000-1500rpm/min离心40min，在血浆与D液的界面上会形成单核细胞层（提取率约为80%）。

3. 吸出单核细胞层，使用细胞洗涤液洗涤三次，备用。

将细胞放入含有4-5毫升细胞洗涤液的试管中，充分混匀后，以1500-2000转/分离心10-30分钟。沉淀经反复洗涤2次即可得到所需的细胞。

该试剂盒的应用领域

该试剂盒用于研究高脂饮食诱导下C57BL/6J小鼠外周血、骨髓单核细胞及骨髓造血干细胞的变化特点及机制

研究发现，脂肪组织的巨噬细胞是促炎因子TNF-α的主要来源。在高脂饮食条件下，巨噬细胞可以干扰胰岛素信号通路，导致胰岛素抵抗的发生。与此相反，敲除TNF-α或其受体TNF-受体1的小鼠在高脂饮食诱导下不易出现胰岛素抵抗。此外，肥胖和2型糖尿病患者的血液中单核细胞数量增多，与动脉粥样硬化、冠心病及脑卒中的发生和预后密切相关。

因此，该试剂盒可用于研究高脂饮食诱导下C57BL/6J小鼠外周血、骨髓单核细胞及骨髓造血干细胞的变化特点及机制。

参考文献

[1] Uysal KT, Wlesbrock SM, Marino MW, et al. Protection from obesity-induced insulin resistance in mice lacking TNF-alpha function. Nature. 1997.

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[3] Flegal Katherine M, Graubard Barry I, Williamson David F, Gail Mitchell H. Cause-specific excess deaths associated with underweight, overweight, and obesity. JAMA: the journal of the American Medical Association. 2007.

[4] Elise Dalmas, Christine Rouault, Meriem Abdennour. Variations in circulating inflammatory factors are related to changes in calorie and carbohydrate intakes early in the course of surgery-induced weight reduction. The American Journal of Clinical Nutrition. 2011.

[5] 刘艳霞. 高脂饮食诱导下C57BL/6J小鼠外周血、骨髓单核细胞及骨髓造血干细胞的变化特点及机制研究[D]. 郑州大学, 2018.