大鼠血管内皮细胞分离液试剂盒是一种用于从动物组织中分离血管内皮细胞的试剂盒。这些血管内皮细胞可以在无菌条件下用于细胞培养等科研用途。
1、首先,使用75%酒精浸泡大鼠,然后打开胸腔,分离主动脉,并将其放入无菌的D-Hanks液培养皿中。
2、使用眼科剪和镊子去除血管周围的脂肪和纤维组织,然后用含抗生素的D-Hanks液冲洗血管内外凝血数次,并将其放入另一个无菌培养皿中。
3、使用眼科剪纵向剪开血管,用手术刀将其切成1立方毫米大小的动脉植块,然后将其种植到培养皿中。种植时,将动脉植块的内膜面与皿底接触,种植密度约为1块/立方厘米。
4、在培养皿中静置2小时后,加入0.5毫升含有25%胎牛血清的培养液,略微盖过动脉植块内膜面。24小时后,更换培养液并加入2-3毫升培养液。
5、大约72小时后,当观察到内皮细胞充分生长,而成纤维细胞刚要生长时,将动脉植块除去,刮出成纤维细胞。然后每两天更换一次培养液,继续培养8-10天,直到细胞融合成单层,即可进行传代。
血管内皮细胞是一种位于血管内壁的多功能细胞,在血管通透性屏障、免疫防御和炎性反应中起着重要作用。研究表明,血管内皮是许多心血管疾病或危险因素的重要靶器官,具有活跃的内分泌和代谢功能。由于大鼠是主要的实验动物,因此建立大鼠血管内皮细胞的体外培养方法对于研究内皮细胞特性以及血管相关药物和抗肿瘤药物具有重要意义。
[1]高瑞金,刘学,崔卫波,谭海明,张碧成,陆倩倩,张雨梅;大鼠血管内皮细胞的分离、鉴定及传代培养。扬州大学兽医学院