请教HPLC的使用，不是仪器使用，是测药品的一般步骤，摸条件，建立方法等的步骤。？

对楼主提出的问题，回答部分，仅作交流。1.如何确定最佳波长？可以用液相自带的紫外或单独的紫外分光光度计扫个谱，在不超过流动相的吸收截止波长情况下，选择一个最佳吸收波长。2.如何确定流动相体系？一般是 ... 并不是要问怎么测，怎么确定，只是问一下一般步骤， 书上都写分离条件的优化， 建立分析方法的步骤等，具体怎么优化分离条件，需要优化那些分离条件， 建立分析方法，方法学等什么的

这个不是几句话就说的清楚的 一般药品测定都有标准的 usp或者ep 药典也可以参考下 实战的书可以推荐《药物色谱分析》 讲的很棒 不是说什么标准什么的，这些我也会查， 我就想知道测一个药品的一般方法， 刚开始是要摸索条件---确定最佳波长，分离度，流动相体系，等等，是不是， 紧接着要方法学验证， 精密度，准确度，专一性， 检测限，等等什么的是不是这样， 就是这些的具体步骤， 药物色谱分析也是理论居多啊， 还是不知道这些啊。

这个不是几句话就说的清楚的 一般药品测定都有标准的 usp或者ep 药典也可以参考下 实战的书可以推荐《药物色谱分析》 讲的很棒

好吧 那以rs的方法建立为例 当楼主拿到一个样品 首先要知道已知杂质是啥子 如果不知道 那就请先做破坏实验 看看在各种条件下 可能会产生啥子杂质 楼主是做合成的 那肯定知道物质在酸碱光照高温条件下大概会发生啥子降解反应吧 完成上面两步后 进行初步的方法开发 如果有已知杂质 例如杂质a 杂质b 以及您的主药 比如qms（青霉素） 将上述物质配置成 qms 0.1mg/ml??杂质a 杂质b 0.001mg/ml （1%）的混合溶液 选用c18长柱 流动相 乙腈-水 （40:60）开始??利用dad进行检测 其中dad开全波长扫描 190nm--400nm 看上述物质在dad的3d模式下哪个波长响应最大 就选择这个波长作为检测波长 此外 根据峰型及分离度调整流动相比例及是否加入缓冲盐 换柱子之类的 此外 楼主拿到一个样品后 也可以根据药典来参考 比如给你一个激素类药物 比如雌二醇 它的结构与药典已知的药物有类似的 比如炔雌醇 你可以根据 炔雌醇的方法来摸索改进雌二醇的方法 方法验证要等方法大概确定后再做 这就要合成的兄弟和制剂的那些家伙给力了

1.如有类似药物的分析方法可以借鉴，在现有基础上优化2.如完全自己建方法，首先需要确定待测分析物的吸收波长，优化波长，选择最佳3.流动相的优化如楼上所说，如果f效果仍不佳可以考虑水相中添加甲酸、醋酸、磷酸氢钠等缓冲盐4.方法建立好，最重要的是样品的前处理，要确保提取出来（回收率）