目前，常使用酶的多克隆抗体作为热启动的方法。酶抗体与酶结合后可以抑制DNA聚合酶的活性。在扩增过程中，抗原抗体复合物能够在高温变性之前抑制聚合酶的活性，从而有效地阻止引物的非特异性退火和引物二聚体导致的非特异性扩增。高浓度的Taq酶抗体在反应的变性步骤中会变性，释放出聚合酶的活性，实现热启动的目的。
制备酶的多克隆抗体的实验方法如下：
首先，选择小鼠C57/BL6作为动物模型。然后，向小鼠体内注射抗原，并加强免疫。一段时间后，取血测量抗血清中抗体的量。当抗体产量不再明显上升时，停止免疫并取得抗血清。所得的抗血清经过简单纯化后即可用于实验研究。抗体增量示意图如下：
为了最大限度地促进反应的进行，抗原与抗体需要以合适的比例孵育结合。抗体量不足时，无法有效抑制抗原化酶在常温下的活性。而抗体量过多时，大量蛋白的存在会严重影响反应的效率。因此，我们可以将得到的抗体分别稀释2、4、8、16、32倍，然后将梯度稀释的抗体与抗原按1:1的比例混匀后置于37°C下孵育4-5小时。
我们可以使用琼脂糖双向免疫扩散实验来检测高浓度Taq酶抗体。该实验原理是在一定的条件下，当可溶性抗原与相应的抗体在电解质存在的情况下相遇，经过一定时间会出现人眼可见的沉淀现象。这种沉淀反应中的抗原称为沉淀原，相应的抗体称为沉淀素。
琼脂糖凝胶是一种多孔的网状结构，分子量较大的物质可以自由通过。我们可以将适当浓度的琼脂糖凝胶与抗原和抗体混合后，观察是否出现白色的沉淀线。若抗原与抗体呈特异性结合且比例适当，就会出现沉淀线。这种方法可以通过双向琼脂扩散实验来实现，常用的孔型有双孔型、三孔型、双排孔型和梅花孔型。
[1] 高纯度聚合酶制备技术研究
[2] Sharkey DJ, Scalic ER, Christy KG Jr, et al. Antibodies as thermilabile swithes: high temperature triggering for the polymerase chain reaction[J]. Nature Biotechnology, 1994, 12(5): 506-509.
1
