随着三氟柳应用范围的扩大，对其含量进行准确检测变得至关重要。本文将介绍两种检测方法，帮助读者了解如何测定三氟柳的含量。
背景：三氟柳于80年代在西班牙等国上市，属于水杨酸类母核结构，在临床上广泛应用于预防中风和心肌梗死，是一种疗效确切，安全可靠的药物。该药通常是以对三氟甲基水杨酸为起始原料，在浓硫酸催化条件下经乙酸酐酰化得到。主要杂质为原料对三氟甲基水杨酸。为了保证合成药品的安全性，其检测方法尤为重要，目前该品种收录于2003版英国药典，其检测方法为滴定法，但滴定法中终点判断误差较大。
测定：
1. 汪波等人采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定三氟柳的含量。具体为：采用Diamon silTM(钻石)C18(250 mm×4.6 mm，5μm)色谱柱，流动相为0.1%磷酸水溶液-乙腈(50∶50)，流速1.0 ml/min，检测波长224 nm。在该色谱条件下，三氟柳在5.15～515μg/ml范围内线性关系良好，r =0.9999。该方法简便、准确、可行，可用于三氟柳的质量控制。线形考察步骤为：
（1）检测波长的选择：取三氟柳25 mg，加甲醇溶解并定量稀释制成每1 ml中含0.02 mg的溶液，照分光光度法检测，样品在224 nm的波长处有最大吸收，因此选择224nm作为三氟柳含量测定的检查波长。
（2）色谱条件及系统适应性色谱柱:Diamonsil TM(钻石) C18(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相:0.1%磷酸水溶液-乙 腈(50∶50);柱温:20℃;进样量:20μl;流速:1.0 ml/min;检测波长:224 nm;理论塔板数不低于3000。
（3）对照品溶液的制备：取三氟柳对照品约25 mg，精密称定，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释成每1 ml中约含 0.5 mg的对照品溶液，即得。
（4）线形考察：取干燥恒重后三氟柳对照品25 mg，精密称定，置于50 ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。量取该溶液0.1 ml、0.2 ml、0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、10 ml分别置于6 个10 ml容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配成梯度浓度的标准溶液。分别取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以浓度(X)对峰面积(Y)作图。计算回归方程为:Y= 41789X+127368，r=0.9999。结果表明:在5.15～515μg/ ml浓度范围内，该法线形良好。
2. 郭海波等人采用HPLC法测定三氟柳的含量及有关物质。色谱柱为Kromasil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为0.3%磷酸水溶液-乙腈-四氢呋喃(60∶30∶10),流速1.0mL.min-1,检测波长278nm。结果表明,三氟柳与各杂质及降解产物分离良好,在0.081～0.81mg.mL-1范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系(R=0.9992),平均回收率为98.25%,RSD为1.11%,最低检测限为1.62ng。该方法操作简便、灵敏、准确度高,可用于三氟柳的质量控制。线形考察步骤为：
（1）色谱条件与系统适用性考察
色谱条件:采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),进样量10 μL,流速1.0 mL·min-1。
首先称取三氟柳对照品适量,用流动相制成浓度为1 mg·mL-1的溶液,在200～400 nm波长处扫描,绘制紫外吸收光谱图,选择适宜的检测波长; 然后从不同配比的甲醇-水、乙腈-水系统中选择适宜的流动相;最终确定适宜的色谱条件。后续实验均在此色谱条件下进行。
（2）线性关系考察
称取三氟柳对照品20.25 mg,置25 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。分别精密量取贮备液1 mL、2 mL、5 mL、7 mL、10 mL置10 mL容量瓶中, 加流动相稀释至刻度,摇匀,浓度分别为0.081 mg·mL-1、0.162 mg·mL-1、0.41 mg·mL-1、0.567 mg·mL-1、0.81 mg·mL-1,进样测定峰面积。以三氟柳浓度为横坐标(x,mg·mL-1)、峰面积为纵坐标(y),绘制标准曲线。在0.081～0.81mg.mL-1范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系。
参考文献：
[1]郭海波,郭旭光,查岭. HPLC法测定三氟柳的含量及有关物质 [J]. 化学与生物工程, 2011, 28 (10): 91-94.
[2]张射兵,刘实,卢洲等. RP-HPLC法测定三氟柳原料的有关物质 [J]. 安徽医药, 2010, 14 (08): 897-899.
[3]汪波. 三氟柳含量测定方法的建立 [J]. 中国实用医药, 2010, 5 (18): 72-73. DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2010.18.215
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