引言：
通过有效的分析方法和技术手段，可以准确测定异绿原酸B的含量及其在不同物质中的分布情况，为其应用和研究提供科学依据。
简介：
金银花（学名LonicerajaponicaThunb.）是忍冬科植物，其干燥花蕾或初开的花被广泛应用于我国中药领域。它以清热解毒、凉散风热为主要功效，常用于治疗热血毒痢、风热感冒、痈肿疔疮以及瘟病发热等疾病。金银花中富含多种有机酸类化合物，具有抗菌、抗炎、抑制血小板聚集、抗血栓和抗氧化等药理活性。
异绿原酸A、B和C是二咖啡酰奎宁酸类化合物，是金银花中的有效活性成分，是一类由奎宁酸与数目不等的咖啡酸通过酯化反应缩合而成的有机酸类天然成分，广泛存在于植物界中。近20年来国内外学者就二咖啡酰奎宁酸类的植物化学和药理进行了深入研究，发现其具有一些重要生物活性，极具临床应用价值。主要的药理活性有抗氧化、抑制氧酶、抗动脉粥样硬化、抗动脉粥样硬化、抗血小板活性物质、调血脂、抗炎、抗病毒、抑制组胺释放、抗纤维化、抑制平滑肌收缩等作用。异绿原酸B的结构如下：
1. 应用
异绿原酸 B（isochlorogenic acid B，ICAB）的结构类似物绿原酸（3-咖啡酰奎尼酸）具有广泛的药理学活性。绿原酸可通过上调 Bcl-2 的表达及下调 caspase-3 的表达抑制乙醇引起的 PC12 细胞的凋亡；通过抗氧化和抗炎作用抑制 D-半乳糖引起的小鼠肝和肾损伤；通过下调 STAT3 和 NF-κB 表达，减轻 α-异硫氰酸萘酯诱导的胆汁淤积性小鼠肝损伤；也可通过增加肝细胞中 ATP 的产生，刺激线粒体氧化磷酸化和抑制糖酵解来抑制脂多糖诱导的肝损伤。此外，绿原酸还可减轻糖尿病性肾病大鼠肾组织的氧化应激损伤。而由于 ICAB 与绿原酸相比具有更多的酚羟基，被证实比绿原酸具有更好的抗氧化和抗神经退行性疾病的药理作用。
2. 含量测定研究
（1）报道一
蔡小兵等人采用UPLC法对酒续断配方颗粒的6个含量指标马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C进行含量测定，并应用一测多评法同时测定6个指标的含量，为其质量控制提供依据。
研究采用超高效液相UPLC-UV，以ACQUITYHSST3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱，以乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱，检测波长为220 nm，流速0.3 ml/min，进样体积2μl，柱温30℃。同时测定酒续断配方颗粒中马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C 6种成分的含量，采用一测多评法，以绿原酸为内参物，通过相对校正因子测定马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C含量，同时采用外标法测定多批酒续断配方颗粒中这6个指标成分的含量，比较计算值与实测值的差异，验证一测多评法的准确性。
建立相对校正因子重现性良好，采用相对校正因子计算的含量值与实测值之间无明显差异。
（2）报道二
许佩勤等人建立了一种高效液相色谱-串联质谱法同时快速、准确测定饮料中7种绿原酸类物质含量的方法。研究不同柱温、流速、色谱柱、提取溶剂、超声时间等对7种绿原酸类物质测定的影响，最终确定试样经90%甲醇水溶液超声提取，采用RP18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱分离，HPLC-MS/MS同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5-二咖啡酰奎宁酸成分含量。
该检测方法简便、准确、可靠，线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求，可用于饮料中7种绿原酸类成分的定量分析。
（3）报道三
任荣军等人建立同时测定艾绒中4种成分含量的高效液相色谱(HPLC)法。研究方法为：色谱柱为Phenomenex Luna C18(2)100A柱(250 mm×4.6 mm,5μm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液(梯度洗脱)，流速为1.0 mL/min，检测波长为325 nm，柱温为30℃，进样量为10μL。
绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C进样量分别在39.16～391.64 ng(r=0.999 1)、41.08～410.82 ng(r=0.999 7)、46.49～464.91 ng(r=0.999 7)、47.12～471.18 ng(r=0.999 9)范围内与峰面积线性关系良好；精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%；平均加样回收率分别为100.06%,99.90%,100.12%,100.19%,RSD分别为2.31%,2.65%,2.01%,1.29%(n=6)。该方法操作简便，结果准确，重复性好，可用于艾绒的质量控制。
参考：
[1]蔡小兵,江斌,李璐,等. 一测多评法同时测定酒续断配方颗粒中6种成分的含量 [J]. 中国处方药, 2024, 22 (03): 50-55.
[2]许佩勤,陈茹,利通,等. 高效液相色谱-串联质谱法测定饮料中7种绿原酸类物质 [J]. 食品科技, 2024, 49 (02): 287-293. DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2024.02.032.
[3]任荣军,湛建峰,陈虹球,等. 高效液相色谱法同时测定艾绒中4种成分 [J]. 中国药业, 2023, 32 (24): 103-106.
[4]倪付勇,宋亚玲,刘露,等. 异绿原酸A、B和C的制备工艺研究[J]. 中草药,2015,46(3):369-373. DOI:10.7501/j.issn.0253-2670.2015.03.012.
[5]刘鑫,徐小薇. 异绿原酸B对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 国际药学研究杂志,2017,44(6):531-536. DOI:10.13220/j.cnki.jipr.2017.06.013.
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