引言：
如何提取异绿原酸B是当前研究中的一个关键问题，其高效、纯度和经济性对于各种应用具有重要意义。通过优化提取条件和工艺，可以有效地获取异绿原酸B，并探索其在医药和化工等领域的应用潜力。
简介：
异绿原酸 B（isochlorogenic acid B，ICAB），又名 3，4-二咖啡酰奎宁酸，是从药用植物金银花中提取的一种多酚类化合物。ICAB 是双黄连口服液的成分之一，同时也是存在于热毒宁注射液中的抗氧化物质。目前，关 ICAB 的药理学研究较少。已有研究证实 ICAB 具有抗氧化、保肝和抗神经退行性疾病的生物活性。此外，分子对接实验表明，ICAB 可能是磷酸二酯酶-5（phosphodiesteras-5，PDE-5）受体的强力抑制剂。
提取与纯化工艺
1. 提取工艺
取10.0公斤金银花，使用10倍量的70%乙醇进行2小时回流提取，然后将滤渣用8倍量的70%乙醇再次回流提取1小时。将合并的提取液过滤后，减压浓缩至相对密度为1.05（25℃）。加入乙醇至体积分数达到80%，静置过夜12小时后再次过滤，将滤液减压浓缩至去除醇味，然后加水稀释至11∶1，再次静置过夜12小时，过滤去除不溶物，即得金银花提取液，可用于后续实验。异绿原酸A、B和C的转移率为92.6%。
2. 纯化工艺
2.1 树脂柱色谱
（1）树脂预处理
选用 D-101 型大孔树脂用 5%氢氧化钠溶液 4 BV 浸泡 24 h，加 4 BV 水洗至中性，加 5%盐酸溶液 4 BV 浸泡 6 h，水洗至中性，加 95%乙醇浸泡 12 h 后洗脱，至流出乙醇液与水混合不产生白色浑浊为止，用足量水洗至无醇味，备用。
（2）吸附洗脱
将预处理好的D-101型大孔树脂柱（尺寸为600 mm×80 mm），精确地装载上提取液。完成吸附后，首先用水洗除去黏液质等杂质，随后以15%乙醇洗脱4体积倍数，最后用45%乙醇洗脱4体积倍数。收集并减压浓缩45%乙醇洗脱液，进行真空干燥、研磨处理，得到165克的异绿原酸粗品（其中异绿原酸A、B和C的质量分数分别为15.7%、8.3%、30.9%），用于后续实验。
2.2 异绿原酸 A、B 和 C 的制备
将乙腈溶液作为 A 相，0.5%甲酸水溶液为 B相，将 2 个灌注管路分别放入 A 相和 B 相中，然后进入洗脱程序表按照优选的溶剂体系比例进行设定（A 相 32%，B 相 68%），时间 30 min，体积流量 20mL/min，再进入紫外检测器的选择系统，设定波长为 326 nm。将自制 C18 填料色谱柱（400 mm×80mm，50 μm）安装好，取“2.3.3”项下异绿原酸粗品 30.0 g，用适量甲醇溶解，分次进样，按上述条件洗脱，并收集保留时间为 10.8～12.5、14.2～16.8和 18.5～22.0 min 的组分，减压浓缩收集液，冷冻干燥，并计算收率（收率＝制备得到的目标成分量/粗品中目标成分量）得异绿原酸 A（峰 2）白色粉末 4.08 g（收率为 86.6%）、异绿原酸 B（峰 1）白色粉末 2.03 g（收率为 81.5%）和异绿原酸 C（峰 3）白色粉末 8.17 g（收率为 88.1%）。色谱图见图。
参考：
[1] 倪付勇,宋亚玲,刘露,等. 异绿原酸A、B和C的制备工艺研究[J]. 中草药,2015,46(3):369-373. DOI:10.7501/j.issn.0253-2670.2015.03.012.
[2] 刘鑫,徐小薇. 异绿原酸B对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 国际药学研究杂志,2017,44(6):531-536. DOI:10.13220/j.cnki.jipr.2017.06.013.
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