蛋白酶的应用领域是什么? ¹

概述^[1]

蛋白酶是一类酶，能够催化蛋白质的水解反应。蛋白酶是酶学研究中最早也是最深入研究的一种酶。据报道，已经发现了超过900种微生物蛋白酶。蛋白酶与生物体的生理活动和疾病的发生密切相关，例如食物消化吸收、血液凝固、溶血作用、炎症、血压调节、细胞分化自溶、机体衰老、癌症转移以及生理活性肽的活化等。

蛋白酶的应用领域是什么？^[1]

Kex2蛋白酶是一种钙离子依赖性蛋白水解酶，能够特异性识别和切割Arg-Arg、Lys-Arg等双碱基氨基酸羧基端肽键。与胰蛋白酶不同，Kex2不能识别和切割单一碱性氨基酸即精氨酸或赖氨酸的羧基端肽键。在酵母体内，Kex2蛋白酶负责加工killer toxin和α-factor的前体。Kex2蛋白酶的活性不受常规的丝氨酸蛋白酶抑制剂如抑肽酶、PMSF、TPCK的抑制。雅心重组Kex2蛋白酶是由毕赤酵母表达生产，与天然的酿酒酵母Kex2酶具有相同的酶特异性。该酶的最适作用pH为pH9.0，稳定储存的pH为pH5.0-6.0。

蛋白酶的产品特性是什么？^[1]

来源：毕赤酵母表达

性状：白色，类白色粉末

比活：≥10.0 units/mg pro.

纯度（蛋白电泳）：单一主条带

分子量（蛋白电泳）：67.0 ± 6.7 kDa

酶活单位：在25℃，50mM Tris-HCl，2mM CaCl2，pH8.0的3ml反应体系中，每分钟催化底物Boc-QRR-pNA释放出1μmol对硝基苯胺（4-nitroaniline）的酶量定义为一个酶活单位（Unit）。

如何使用蛋白酶？^[1]

推荐反应缓冲液：pH 7.0-9.0，50mM Tris-HCl，2mM Ca²⁺ 或者HEPES，5mM Ca²⁺。若溶解后不马上使用，建议使用20mM (pH 5.2) NaAc-HAc，2mM Ca²⁺ 缓冲液溶解冻干粉，溶解后酶的终浓度约为1-10mg/ml，按照需要分装后储存-20℃以下储存。反应时，用pH 7.0-9.0，50mM Tris-HCl，2mM Ca²⁺ 或HEPES，5mM Ca²⁺作为反应稀释液。

注：酶的最适反应pH为pH9.0，稳定pH为5.0-6.0。

蛋白酶的储存和运输稳定性如何？

（1）冻干粉储存稳定性：2-8℃，避光，防潮保存。

溶解保存缓冲液（20mM NaAc-HAc，pH 5.2，2mM Ca²⁺），溶解后存于-20℃以下，6个月稳定。反复冻融5次，无活性损失。

（2）运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。

蛋白酶的产品优势是什么？^[1]

（1）无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。

（2）质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。

（3）纯度高：比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。

（4）冻干粉：易于储存和运输。

（5）符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。

（6）质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。

主要参考资料

[1] 胡学智, & 王俊. (2008). 蛋白酶生产和应用的进展 (Doctoral dissertation).