本文旨在探讨合成2-脱氧腺苷的方法，通过深入研究这一合成过程，有望为相关领域的发展提供新的见解和启发。
背景：抗病毒药物如拉米夫定、阿德福韦、替比夫定和恩替卡韦等都属于核苷类或核苷酸类化合物，其中部分采用化学合成法生产，如已应用于临床的阿糖腺苷、三氮唑核苷等。2-脱氧腺苷(Deoxyade nosine，dA)是一种天然的脱氧核苷，是脱氧核糖核酸DNA的结构片段，被广泛地应用于合成寡聚核苷酸和基因工程的研究中，同时是合成多种抗病毒、抗瘤药物的重要中间体。
2'-脱氧腺苷可通过脱氧核糖核酸的降解而得到,但是由于DNA供应的不稳定,以及降解后产物分离困难等原因,使得该方法并不实用。化学合成法合成2′-脱氧腺苷又存在步骤复杂、异构体不好分离、转化率低、原料成本高、污染环境等问题。
1. 固定化细胞转化脱氧胸苷合成：
1.1酶促转化用菌体细胞的制备
将冷藏备用的AEM0957菌种活化后接种于牛肉膏蛋白胨培养基，37℃、180 r/min恒温振荡器培养22 h。用高速冷冻离心机4500 r/min离心收集菌体，所得湿菌体冷藏备用。
1.2 细胞固定化方法
1.2.1 海藻酸钠固定化细胞
将4%海藻酸钠溶液10mL与菌体细胞2 g混匀，使用6号针头注射器滴入2%CaCl2溶液中，得到固定化颗粒，4℃静置固定化4 h，洗涤后备用。
1.2.2 明胶固定化细胞
将保温于40℃的10%明胶溶液10mL与菌体细胞2 g混匀，铺成2 mm厚的膜，4℃冷却2 h，切成2 mm3左右的小块，加入0.5%戊二醛溶液交联30 min，10%甲醛溶液通透处理1h，洗涤后备用。
1.2.3 琼脂固定化细胞
取琼脂0.6 g溶于100 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH 7.0)10mL，菌体细 胞2 g溶于磷酸二氢钾缓冲液中，置于60℃水浴内，待两瓶温度基本一致后，混合摇匀。倒入培养皿中待其凝固，凝胶切成3 mm3小块，用缓冲液洗去残渣待用。
1.2.4 聚丙烯酰胺固定化细胞
菌体细胞2 g加100 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(p H 7.0、)13.7mL于锥形瓶中，加62.5%聚丙烯酰胺单体4.8mL，3.3%交联剂N-N'-甲撑双丙烯酰胺4.8mL、50%β-二甲基氨丙腈催化剂0.4mL和2.5%过硫酸钾引发剂1.6mL以及2.5%维生素C溶液0.5mL，搅拌均匀，倒入培养皿，25℃ 静置30 min，聚合成凝胶。
1.2.5 卡拉胶包埋
卡拉胶、明胶溶于100 mmol/ L磷酸钾缓冲液(pH 7.0)，37℃与菌体2 g混匀，铺成1～2 mm厚的膜，凝固后切成小块，用戊二醛溶液交联1 h，10%甲苯处理30 min，抽滤洗净后置冰箱备用。
1.2.6 聚乙烯醇(PVA)海藻酸钠固定化细胞
10%PVA水溶液10mL，加入海藻酸钠0.02 g充分溶解，然后与菌体细胞3 g混匀，使用6号针头注射器，滴入2%CaCl2的饱和硼酸溶液中，边滴入边搅拌，在4℃冰箱固定8 h，甲苯处理水溶液通透处理 1 h，清洗备用。
1.3 酶促反应体系
生物转化合成dA的反应体系:将反应底物A 和dT与一定量的菌体细胞混合，加入pH 7.0，60 mmol/L的磷酸钾缓冲液，在55℃水浴振荡下进行生物转化反应6 h。
2. 微生物转化合成
2.1 菌体制备
使用15 L自动发酵罐装8 L产酶培养基，接种量为5 %，在37 ℃下培养8-9 h，然后在4 ℃条件下4500 rpm离心10 min，湿菌体用p H 7.0、20 mmol/L的磷酸钾缓冲液洗涤两次，离心所得湿菌体-20 ℃冷冻保存备用。
2.2 酶促转化
生物转化合成脱氧腺苷的反应体系，选择以腺嘌呤和脱氧胸苷转化反应底 物，其浓度分别为15 mmol/L，与10 %的湿菌体，加入150 mmol/L pH 7.0的磷酸钾缓冲液，在60℃水浴振荡条件下进行生物转化反应5 h。
2.3 转化产物的分离提取
（1）酶促反应结束后，5000 rpm离心10 min，把上清液放置一容器内然后进行下一步的提取工作。
（2）上清液经过离子交换柱后，酶促反应液除去菌体细胞后的滤液，先经过离子交换柱，可收集到胸苷和胸腺嘧啶，将仍然吸附在柱子上的脱氧腺苷和腺嘌呤，用盐液冲下后，收集，浓缩。
（3）浓缩后的液体取200 μL浓缩液点样在新华1号滤纸上，纸层析展开，取出滤纸40 ℃烘箱烘干后在紫外分析仪254 nm波长下观察，用铅笔画出各个紫色斑点，剪下浓缩液中对应标准品脱氧腺苷的斑条。多次纸层析后，将多个脱氧腺苷斑条进入水中浸泡一段时间，抽滤，滤液冷冻干燥，得晶体，称重。
参考文献：
[1]刘国生,陈琳,邢善涛等. 固定化细胞转化脱氧胸苷合成2'-脱氧腺苷 [J]. 中国生化药物杂志, 2012, 33 (05): 563-567.
[2]王建琨. 微生物转化合成2’-脱氧腺苷[D]. 河南师范大学, 2011.
[3]洪云海,丁庆豹,欧伶等. 应用乙酰短杆菌酶法合成2’-脱氧腺苷 [J]. 工业微生物, 2006, (01): 30-33.
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