二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)ELISA KIT是一种应用双抗体夹心法测定标本中DPYSL3水平的试剂盒。该试剂盒利用纯化的DPYSL3抗原包被微孔板,形成固相抗原。然后,在包被单抗的微孔中依次加入DPYSL3样本和HRP标记的DPYSL3抗原,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。根据颜色的深浅与样品中的DPYSL3水平呈正相关,在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中DPYSL3浓度。
1. 使用前,充分混匀所有试剂,避免产生大量泡沫。
2. 根据样品数量和标准品数量决定所需的板条数。建议每个标准品和空白孔做复孔,每个样品根据数量尽量做复孔。
3. 加入稀释好的标准品和待测样品到反应孔中,然后立即加入生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,然后甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次,如果使用洗板机洗涤,则增加一次洗涤。
5. 每孔加入亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,然后甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次,如果使用洗板机洗涤,则增加一次洗涤。
7. 每孔加入底物A和B,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入终止液,然后立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
该试剂盒可用于研究结直肠癌患者中5-FU代谢相关酶的表达水平与5-FU疗效、毒性反应以及临床病理的相关性。通过测定血中源性二氢尿嘧啶(UH2)/尿嘧啶(U)值来代表血中DPD活性,同时使用免疫组织化学方法检测癌组织和正常结直肠粘膜组织中的TP和TS表达。评价患者血DPD活性与5-FU化疗毒性、TP和TS表达与5-FU化疗疗效、临床病理因素之间的相关性。
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