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如何使用DPYSL3 ELISA KIT测定二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)水平? 1

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二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)ELISA KIT是一种应用双抗体夹心法测定标本中DPYSL3水平的试剂盒。该试剂盒利用纯化的DPYSL3抗原包被微孔板,形成固相抗原。然后,在包被单抗的微孔中依次加入DPYSL3样本和HRP标记的DPYSL3抗原,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。根据颜色的深浅与样品中的DPYSL3水平呈正相关,在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中DPYSL3浓度。

如何操作DPYSL3 ELISA KIT?

1. 使用前,充分混匀所有试剂,避免产生大量泡沫。

2. 根据样品数量和标准品数量决定所需的板条数。建议每个标准品和空白孔做复孔,每个样品根据数量尽量做复孔。

3. 加入稀释好的标准品和待测样品到反应孔中,然后立即加入生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,然后甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次,如果使用洗板机洗涤,则增加一次洗涤。

5. 每孔加入亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,然后甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次,如果使用洗板机洗涤,则增加一次洗涤。

7. 每孔加入底物A和B,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8. 取出酶标板,迅速加入终止液,然后立即测定结果。

9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

DPYSL3 ELISA KIT的应用

用于5-FU代谢相关酶检测及临床意义研究

该试剂盒可用于研究结直肠癌患者中5-FU代谢相关酶的表达水平与5-FU疗效、毒性反应以及临床病理的相关性。通过测定血中源性二氢尿嘧啶(UH2)/尿嘧啶(U)值来代表血中DPD活性,同时使用免疫组织化学方法检测癌组织和正常结直肠粘膜组织中的TP和TS表达。评价患者血DPD活性与5-FU化疗毒性、TP和TS表达与5-FU化疗疗效、临床病理因素之间的相关性。

参考文献

[1] Thymidine Phosphorylase and Dihydropyrimidine Dehydrogenase Expression Levels in Tumor and Normal Tissue Specimens of T3 Human Colorectal Carcinoma[J]. Atsushi Okita, Kazunori Tsukuda, Masakazu Murakami, Tetsuya Ota, Hiroyoshi Doihara, Manabu Suda, Tomoharu Nakano, Kinya Matsuoka, Eiji Suzuki, Minoru Naito, Akio Andou, Nobuyoshi Shimizu. Surgery Today. 2006(4)

[2] Influence of chemotherapeutic agents and cytokines on the expression of 5-fluorouracil-associated enzymes in human colon cancer cell lines[J]. Kaori Miyazaki, Takeshi Shibahara, Daisuke Sato, Kazuhiko Uchida, Hideo Suzuki, Hirofumi Matsui, Akinori Yanaka, Akira Nakahara, Yasushi Matsuzaki. Journal of Gastroenterology. 2006(2)

[3] Thymidine phosphorylase, dihydropyrimidine dehydrogenase and thymidylate synthase mRNA expression in primary colorectal tumors - correlation to tumor histopathology and clinical follow-up[J]. International Journal of Colorectal Disease. 2006(3)

[4] Thymidine phosphorylase and dihydropyrimidine dehydrogenase activity in colorectal carcinoma and patients prognosis[J]. Masahide Ikeguchi, Masato Makino, Nobuaki Kaibara. Langenbeck's Archives of Surgery. 2002(5-6)

[5] 邢洪存. 5-FU代谢相关酶检测及临床意义[D]. 吉林大学, 2006.

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