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人表皮角蛋白(EK)ELISA KIT的应用? 1

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背景[1-3]

人表皮角蛋白(EK)ELISA KIT采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。该试验通过在预先包被抗体的包被微孔中加入标本、标准品和HRP标记的检测抗体,经过温育和洗涤,然后用底物TMB显色。颜色的深浅与样品中的角蛋白含量呈正相关。最后,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)来计算样品的活性。

角蛋白是构成生皮表皮、毛皮毛囊的主要蛋白质。角蛋白是中间纤维蛋白(intermediate protein,IP)家族的重要成员。角蛋白肽链为多结构域肽链,分为高度保留的棒状的中间区域和端肽区域。棒状结构域的肽链存在8肽重复的周期性序列结构。所有的中间纤丝蛋都具有相似的肽链构造。角蛋白肽链是典型的a螺旋。酸性和碱性角蛋白肽链相互结合形成的异体复合螺旋是角蛋白的特征构象形式。现已发现的角蛋白肽链超过20种,毛角蛋白和表皮角蛋白分别由不同的角蛋白肤链构成。角蛋白含有较高的半胱氨酸,半胱氨酸的交联是角蛋白的主要交联结构,角蛋白的物理和化学性质主要与该交联结构相关。

角蛋白是外胚层细胞的结构蛋白,包括毛发、指甲、羽毛等。角蛋白是一种不能直接为畜禽吸收利用的硬蛋白,主要存在于动物的毛发、羽毛和蹄中,资源非常丰富。它必须经过高温、高压、酸、碱或酶处理,变成短肽或游离氨基酸,才能被畜禽利用。羽毛主要由角蛋白构成,蛋白质含量及必需氨基酸含量极高,氨基酸组成相对稳定,是一种公认的具有较高营养价值、质量稳定的潜在优质蛋白源。

应用[3]

用于表皮干细胞的体表分布及其分离、培养和鉴定

表皮干细胞在人体不同部位皮肤的分布差异。本研究从18-45岁成年男性志愿者身上取得头部、胸部、背部、臀部、大腿内侧、大腿外侧、上臂内侧、上臂外侧、手掌、足底、包皮及阴囊皮肤标本。标本经过固定、包埋和切片后,采用免疫组织化学EnVision法检测皮肤组织中表皮干细胞标志物角蛋白19和整合素β1的表达。通过观察免疫组化结果并记录阳性细胞数,使用SPSS软件分析不同部位皮肤表皮基底层中角蛋白19和整合素β1阳性细胞率的差异。

本研究还对表皮干细胞进行了分离、培养、鉴定和生长特性观察。通过DispaseⅡ酶和胰蛋白酶的分离方法,将表皮细胞分为10分钟粘附组和24小时粘附组。通过流式细胞仪检测转录因子p63和角蛋白19的标记率,并比较两组细胞标记率的差异。同时,观察细胞的克隆形成率和在不同时间点的表达特征。

参考文献

[1]Recovery and repopulation in vivo by mouse skin epithelial cells during fractionated irradiation. Withers H R. Radiation Research . 1967

[2]Stem cells in the skin: waste not, Wnt not. Alonso L,Fuchs E. . 2003

[3]牛云飞. 表皮干细胞的体表分布及其分离、培养和鉴定[D].第二军医大学,2004.

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