周期素依赖性激酶4(CDK-4)ELISA KIT是一种用于测定标本中CDK-4水平的双抗体夹心法。该方法利用纯化的CDK-4抗体包被微孔板，形成固相抗体。然后，将CDK-4样品加入微孔中，与HRP标记的CDK-4抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，最终转化成黄色。颜色的深浅与样品中的CDK-4浓度呈正相关。通过酶标仪测定450nm波长下的吸光度（OD值），可以计算出样品中CDK-4的浓度。
周期素依赖性激酶（CDKs）是一类蛋白质激酶家族，最早是因其在细胞周期调控中的作用而被发现。除了参与细胞周期调控外，CDKs还涉及转录调控、mRNA加工和神经细胞分化等过程。细胞周期失控是癌症的一个标志性特征，CDK4和CDK6是细胞周期的关键调节因子。在许多细胞中，CDK4/6过度活跃，导致细胞增殖失控。在雌激素受体阳性乳腺癌中，CDK4/6的过度活跃也非常常见。
CDKs是一类在已知所有真核生物中存在的酶，其在细胞周期调控中的作用非常保守。实际上，将人类的同源基因替换酵母细胞中的CDK基因后，酵母细胞仍然可以正常生长和分裂。CDK是相对较小的蛋白，分子量在34到40千道尔顿之间，包含多个激酶结构域。
周期素依赖性激酶4（Cdk4）是丝氨酸/苏氨酸激酶家族的成员，与周期蛋白D（Cyclin D）结合形成复合物，推进细胞周期G1期的进程。大量研究表明，Cdk4在肿瘤发生中起着重要作用。然而，Cdk4在恶性肿瘤转移中的作用及其作用机制尚不清楚。本研究以乳腺癌细胞系为模型，探究Cdk4在肿瘤转移中的作用。通过Cdk4 RNA抑制和Cdk4过表达的方法，构建了Cdk4抑制和过表达的乳腺癌细胞系。划痕实验和Transwell实验的结果显示，抑制Cdk4表达后，乳腺癌细胞的侵袭转移能力明显降低；而过表达Cdk4后，乳腺癌细胞的侵袭转移能力明显增强。
此外，体内实验的结果也进一步证明了上述发现。同种移植模型和异种移植模型都显示，Cdk4抑制后，小鼠肺转移的发生时间较晚，转移灶数量减少。这些结果表明，Cdk4促进乳腺癌细胞的侵袭转移。通过基因芯片技术和Real-time PCR技术检测了Cdk4抑制和过表达前后一系列与细胞侵袭转移相关因子的表达变化。结果显示，Cdk4促进这些因子的表达。这提示Cdk4通过调控与肿瘤侵袭转移相关的因子来促进乳腺癌细胞的侵袭转移。本研究揭示了Cdk4在肿瘤侵袭转移中的重要作用，并进一步探索了Cdk4在乳腺癌细胞侵袭转移过程中的作用机制，为基于Cdk4的乳腺癌治疗提供了新的理论基础和依据。
[1] Gene Hypermethylation in Multiple Myeloma: Lessons from a Cancer Pathway Approach[J]. Chor S. Chim, Yok L. Kwong, Raymond Liang. Clinical Lymphoma & Myeloma. 2008(6)
[2] The Impact of Transgenic IGF-IR Overexpression on Mammary Development and Tumorigenesis[J]. Robert A. Jones, Roger A. Moorehead. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 2008(4)
[3] Switching cyclin D-Cdk4 kinase activity on and off[J]. Stacy Blain. Cell Cycle. 2008(7)
[4] Gene profile analysis of colorectal cancer cell lines by cDNA macroarray[J]. Noboru Saito, Shingo Kameoka, Ryuji Furukawa. Oncology Reports. 2007(5)
[5] 谢晋鹤. 细胞周期依赖性激酶4在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用[D]. 首都师范大学, 2009.
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