冬凌草甲素（Ori）是一种生物活性的菊苣二萜，是冬凌草的主要活性成分，已被广泛用于中药中。最近发现冬凌草甲素具有抗炎的活性，但其潜在的机制和直接目标尚不清楚。
在炎性的发生机制中，NLRP3炎性体起着中枢的作用。NLRP3炎性体是由先天免疫传感器NLRP3，ASC和caspase-1组成的多蛋白复合物。这种复合物的组装导致caspase-1的激活，促进pro-IL-1β和pro-IL-18的裂解，从而产生成熟和功能性IL-1β和IL-18。冬凌草甲素被报道能够治疗炎性反应，但是其机理尚不清楚。
首先我们检测了冬凌草甲素能够抑制caspase-1的切割和IL-1β分泌，从而阻断NLRP3活化，并且对TNF-α的产生没有影响。之后发现冬凌草甲素不能抑制LPS诱导的前IL-1β，NLRP3表达和TNF-α产生。从而证实冬凌草甲素特异性抑制NLRP3炎性体激活。
接着，研究冬凌草甲素是如何阻断NLRP3活化。发现冬凌草甲素不影响NLRP3上游的信号传导通路，并且能够抑制尼日利亚菌素诱导的内源性NLRP3炎性体复合物形成，并发现其阻断了内源性NEK7-NLRP3和NLRP3-ASC相互作用，表明冬凌草甲素可能通过阻断NLRP3来阻止NLRP3-NEK7炎性体组装。
由于冬凌草甲素能通过阻止NLRP3-NEK7相互作用来阻止NLRP3炎性体组装，猜测冬凌草甲素可能直接靶向NLRP3或NEK7。发现LPS-BMDM的细胞裂解物与bio-Ori一起孵育时，NLRP3能够在bio-Ori pull down实验中鉴定到，而NEK7、ASC或caspase-1则没有被鉴定到。
为了进一步检验冬凌草甲素是否直接结合NLRP3，将纯化的NLRP3蛋白与bio-Ori一起孵育，并且通过bio-Ori pull down GFP-NLRP3，证实冬凌草甲素直接与NLRP3相互作用。考虑到冬凌草甲素的结构，猜测冬凌草甲素能够特异与NLRP3上的半胱氨酸形成共价的化学键，因此，构建了NLRP3突变体，将其中的九个半胱氨酸都突变成为丙氨酸，结果显示半胱氨酸279（C279A）的突变消除了NLRP3与冬凌草甲素的结合。
总之，本文显示冬凌草甲素可以靶向NLRP3以发挥其抗炎活性。并且冬凌草甲素在与Cys279共价结合时，阻断了NLRP3-NEK7相互作用和随后的NLRP3炎性体组装和活化，从而有效抑制了NLRP3相关疾病。
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