菜豆凝集素(PHA)ELISA试剂盒是一种应用双抗体夹心法测定标本中凝集素(PHA)水平的方法。
在这种方法中，首先将纯化的凝集素(PHA)抗体包被在微孔板上，形成固相抗体。然后依次加入凝集素(PHA)样品和HRP标记的凝集素(PHA)抗体，使其形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过彻底洗涤后，加入底物TMB进行显色。根据颜色的深浅和样品中凝集素(PHA)的浓度呈正相关，可以通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，并通过标准曲线计算样品中凝集素(PHA)的浓度。
菜豆凝集素(PHA)ELISA试剂盒的操作步骤如下：
1. 标准品的加样：在标准品孔中加入不同浓度的标准品。
2. 加样：在待测样品孔中先加入样品稀释液，然后再加入待测样品。加样时要将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 加酶：每孔加入酶标试剂，除了空白孔。
4. 温育：封板后置于37℃温育60分钟。
5. 洗涤：揭掉封板膜后，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂A，再加入显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
7. 终止：每孔加入终止液，终止反应。
8. 测定：以空白孔调零，依序测量各孔的吸光度(OD值)，波长为450nm。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
该方法可以用于提取、分离和纯化豆类凝集素。通过对不同种属、不同地区的食用豆类进行测定和考察，可以评估凝集素的总活力和特异性活力。以小黑芸豆为例，还可以探讨粗提取因素对凝集素提取的影响，并确定硫酸铵分级沉淀的饱和度范围。通过DEAE-52和S-200的纯化，可以得到凝集素的纯品。
此外，该方法还可以用于测定不同食用豆类的水溶性蛋白含量、总活力和特异性活力，并探讨种属和地域对豆类凝集素的影响。以小黑芸豆为例，还可以研究种籽不同部位的凝集素分布情况。
实验结果表明，菜豆属的豆类总活力和特异性活力较高，红芸豆的活性最高，有两种芸豆未表现出凝集活性；豇豆属和大豆属的凝集素总活力和特异性活力显著低于菜豆属。子叶中凝集素总活力和特异性活力均最高，种皮中未检出凝集素。
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