原位细胞凋亡试剂盒的原理和应用？ ¹

原位细胞凋亡试剂盒是一种用于检测细胞凋亡过程中细胞核DNA断裂情况的试剂盒。它利用生物素标记的dUTP在TdT酶的作用下连接到凋亡细胞中断裂的DNA末端，并与连接了辣根过氧化酶的链霉亲和素特异结合。在辣根过氧化酶底物DAB存在下，产生深棕色的颜色反应，可以准确地定位和计数凋亡细胞。正常或增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因此很少被染色。

原位细胞凋亡试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。

凋亡是许多正常生理过程所必需的，包括免疫系统的成熟和作用机制、组织器官和肢体的发生、神经系统的发生等。在许多病理条件下，凋亡机制的调节失衡起着重要作用，包括组织细胞的缺血、缺氧、出血、中风、心脏病、癌症、艾滋病、自身免疫缺损和中枢神经系统的退行性变等。细胞凋亡在癌基因研究中引起广泛关注，因为抗癌药物、放射和高热等可以启动细胞凋亡，并且肿瘤细胞具有启动凋亡的内在特性。

如何使用原位细胞凋亡试剂盒

1. 标记DNA链断端：使用TdT催化，以FITC标记的核苷酸进行非模板依赖的3-OH端DNA末端聚合反应。

2. 结合FITC：使用HRP或AP标记的羊抗FITC抗体（Fab段）与聚合到DNA末端的FITC结合。

3. 底物显色：使用酶的底物进行显色，常用的是HRP的DAB显色和AP的BCIP/NBT显色。

原位细胞凋亡试剂盒的应用

人植入前胚胎细胞超薄电镜切片的制作及应用TUNEL技术对该细胞凋亡的原位检测研究

该研究改进了人植入前胚胎细胞超薄切片的制备方法，观察了不同时期人早期胚胎细胞超微结构的变化。通过TUNEL技术对植入前胚胎细胞凋亡的原位检测，建立了一种检测人植入前胚胎凋亡征象的方法。

结果显示，在镜下可以观察到胚胎细胞的正常形态和凋亡的形态变化。采用TUNEL法加荧光共焦显微镜观察凋亡细胞的方法可以有效检测人植入前胚胎中的凋亡征象，其中细胞碎片的出现可能与凋亡有关。

参考文献

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