人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验法来检测样本中细胞角蛋白20(CK-20)的浓度。
实验原理是将人细胞角蛋白20(CK-20)捕获抗体包被在微孔中，然后依次加入标本、标准品和HRP标记的检测抗体。经过温育和洗涤后，使用底物TMB进行显色。颜色的深浅与样品中的人细胞角蛋白20(CK-20)浓度呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，并计算样品浓度。
人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒是一种用于检测样本中细胞角蛋白20(CK-20)浓度的试剂盒。
1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔中加入不同浓度的标准品50μL。
3. 样本孔中加入待测样本50μL，空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，使用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。
5. 弃去液体，使用吸水纸拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1分钟，甩去洗涤液，使用吸水纸拍干。重复洗板步骤5次(也可使用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。
7. 每孔加入终止液50μL，在15分钟内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
通过对垂体ACTH腺瘤中细胞角蛋白CK7/CK20的对照表达进行研究，探讨其与肿瘤的生物学行为的关系，为临床评估垂体ACTH腺瘤患者的预后以及筛选侵袭性垂体ACTH腺瘤等提供参考。
方法：对28例病理检查为垂体ACTH腺瘤的切片，应用免疫组化SP法检测垂体ACTH腺瘤切片中CK7/CK20的表达，并与临床资料进行关联。结果显示，在CK7切片组中有14例表达，其表达与患者性别、肿瘤大小、有无Cushing综合征无关，但在侵袭性垂体ACTH腺瘤中的表达显著高于非侵袭性ACTH腺瘤（P<0.05）；在CK20切片组中有16例表达，与患者性别、侵袭性、肿瘤大小、有无Cushing综合征无关；并且CK7与CK20在垂体ACTH腺瘤中的表达无差异性。
结论：垂体ACTH腺瘤中CK7和CK20的表达较高；CK7的表达可作为判断垂体ACTH腺瘤侵袭性生物学行为的参考指标之一。
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