亚叶酸钙的制备方法是什么? ¹

亚叶酸钙是叶酸还原型的甲酰化衍生物，是叶酸在体内的活化形式。它具有解救过量叶酸拮抗物在体内的毒性反应的作用，有利于胸腺嘧啶核苷酸、DNA、RNA以及蛋白质的合成，同时能刺激白细胞的生长和成熟。亚叶酸钙主要用作叶酸拮抗剂的解毒剂，适用于口炎性腹泻、营养不良、巨幼细胞性贫血以及白细胞减少症等疾病的治疗。近年来，亚叶酸钙还被用作结肠、直肠癌的辅助治疗，与氟脲嘧啶联合应用可延长存活期。

亚叶酸钙杂质H的制备方法

亚叶酸钙杂质H的制备步骤如下：

1）制备（6R，6S）-5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸的α-2,6-二氯苄基单酯

将500mg（6R，6S）-5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸和56mg Na2CO3加入20mL二甲基亚砜中，然后加入317mg α-2,6-二氯苄基溴，混合物在室温下搅拌15小时。将反应混合物倒入250mL冰冷的水中，通过离心收集橙黄色沉淀。将沉淀物悬浮在另外的250mL冰冷水中，再次离心。丢弃滤液，将沉淀物冷冻干燥。通过快速色谱法纯化干燥的粗制混合物，得到纯的α-2,6-二氯苄基单酯。

2）分离（6R，6S）-5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸的α-2,6-二氯苄基单酯

将20mg（6R，6S）-5-甲酰基5,6,7,8-四氢叶酸的α-2,6-二氯苄基单酯溶解在500mL 5:1 CHCl3-MeOH中，注入硅胶柱中，使用CHCl3-MeOH-乙酸的混合物进行洗脱。收集出现的两个峰，分别命名为A和B。重复该过程10次，蒸发溶剂并真空干燥，得到峰A和峰B的纯化产物。

3）脱保护5-甲酰基-5,6,7,8-四氢叶酸的（6R）和（6S）非对映异构体

将来自峰A和B的1mg固体分别添加到两个装有10mL 0.1NNaOH的试管中，经过一定时间后，用乙酸调节溶液的pH至7。将溶液注入白蛋白柱进行分离，得到纯的（6R）和（6S）非对映异构体。

主要参考资料

[1] (US5698693) Process of separating the diastereomers of (6R,6S) -5,6,7,8-tetrahydrofolic acid derivatives.