亚叶酸钙是叶酸还原型的甲酰化衍生物，是叶酸在体内的活化形式。它具有解救过量叶酸拮抗物在体内的毒性反应的作用，可以促进白细胞生长和成熟，刺激胸腺嘧啶核苷酸、DNA、RNA以及蛋白质的合成。亚叶酸钙可以限制甲氨蝶呤对正常细胞的损害程度，通过竞争作用逆转甲氨蝶呤对骨髓和胃肠黏膜的反应，但对已存在的甲氨蝶呤神经毒性无影响。它主要用作叶酸拮抗剂的解毒剂，适用于口炎性腹泻、营养不良、妊娠期或婴儿期引起的巨幼细胞性贫血以及白细胞减少症。此外，亚叶酸钙还可以作为结肠、直肠癌的辅助治疗药物，与氟脲嘧啶联合应用可以延长存活期。亚叶酸钙杂质7是亚叶酸钙合成过程中可能产生的杂质之一。
亚叶酸钙杂质7的制备方法如下：在室温和氩气气氛下搅拌的同时，向200毫升0.2N的三羟甲基氨基氨基甲烷盐酸盐水溶液中，该水溶液已用盐酸调节至pH8.3。分批加入15克（6RS）-N（5），N（10）-亚甲基-THF.Cl3和20％NaOH水溶液，得到pH为8.3的澄清溶液。将该溶液加热至30℃，将3.7gCaCl2·2H2O溶于少量水（约10ml）中，并加到上述溶液中。几分钟后开始自发结晶。将混合物在相同温度下搅拌2小时。滤出结晶固体，用水洗涤一次，用94％乙醇洗涤一次，用丙酮洗涤一次，并在60℃的温度下减压干燥。得到5.5克（6R）-N（10）-甲酰基-THF.Ca2+(亚叶酸钙杂质7)的白色晶体。反相柱上的HPLC分析显示出98％的化学纯度。MS[FAB/基质：硫代甘油]：m+：512，对应于经验式C20H23N4O6Ca。
IR（KBr）：3407、3345、3220、1660、1635、1605、1575、1545、1505、1455、1425、1410、1360、1330cm-1。为了测定非对映异构体的纯度，将15mg上述晶体溶于1.5ml的1.8％对甲苯磺酸溶液中。此后，加入6mg的NaBH3CN，并将混合物在室温下搅拌30分钟。顺便提及，（6R）-N（10）-甲酰基-THF被完全转化为（6S）-N（5）-甲基-THF。使用手性HPLC柱（RESOLVOSIL）分析后一种化合物，显示非对映异构体纯度为85％。
[1] EP0535710A1 Process for the preparation of alkaline earth metal salts of (6R)-N(10)-formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid.
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