转化成发螢光的邻－羟基肉桂酸碱金屬盐的试验法
当香豆素溶解于苛性碱时，会发生吡喃酮环分裂，生成邻－羟基肉桂酸的碱金屬盐，或其阴离子：
新配制的或储藏数月的碱性溶液在紫外光下不显示萤光。但是，经过紫外光照射后，几分钟内会出现黄-绿色的螢光，并且强度会增加到最大限度。（长时间暴露于日光下也会发出螢光。）取新配制的香豆素碱性溶液一滴，放在滤纸上，用黑纸盖住斑点的一半，然后用紫外光照射，这个光效应就会有效地显示出来。暴露部分在1分钟内开始发出螢光，并且强度持续增加。在6～8分钟后，揭开斑点的其余部分，强烈螢光的部分与其他部分明显不同。如果之后再次照射，原本被盖住的部分也会开始发出螢光，并且在足够的暴露时间后，整个面积会呈现均匀的螢光。
可以合理地假设，香豆素溶解于苛性碱时，最初产物是不发螢光的顺式邻－羟基肉桂酸（a），经过照射后，它会转化成发螢光的反式（b）：
将（a）和（b）进行比较，即苦马酸（顺－邻－羟苯丙烯酸）的阴离子和香豆酸（反－邻－羟苯丙烯酸）的阴离子进行比较，可以发现，只有按照（b）式中酚基内H－原子的位置安放方式，才能使它对未饱和C－原子的螯合作用（6节环）不受COOH基团的阻隔。这才有可能建立起螯形结合与螢光之间的因果关系。
这种试验法说明了光效应也可出现于苯环内无自由OH基团的香豆素衍生物的碱性溶液中。取代基可能会影响萤光出现的速度。例如，将佛手脑的碱性溶液一滴放在滤纸上，并暴露于紫外光下，只有在暴露约10分钟后才能辨认出螢光开始，而螢光强度的增加比等克分子浓度的香豆素溶液慢得多。
香豆素衍生物的苯环内有自由OH基团的化合物（如繖形酮（7－羟基香豆素）、七叶亭（6，7二羟基香豆素）、瑞香素（7，8－二羟基香豆素）等），在固态或碱性溶液中都会显示深蓝色的螢光，这是众所周知的。这些化合物在碱性溶液中不会发生光效应。
香豆素的碱性溶液经紫外线照射后会发出螢光，即使是少至0.005微克的香豆素也可以辨认出。相应的稀释限度为1：10000000。这种类型的试验对香豆素不是特效性的，因为不含羟基衍生物也有相同的性质，而羟基香豆素具有自发螢光，使得由照射产生的螢光难以确定。
如果利用香豆素具有明显蒸气压的特性，即可得到一种特效的香豆素试验法。这种方法是将香豆素蒸气与苛性碱接触，形成（a），然后用紫外光照射使其转化成发螢光的产物（b）。
操作步骤：在一个微量试管中，将待测试物的醚溶液蒸发，或取固体的一小部分放入试管中。用曾经浸湿过1N苛性碱的滤纸盖住试管口，并将试管底部放入热水中。几分钟后，将纸放在石英灯下，会出现发黄-绿色螢光的圆圈。
鉴定限度：0.5微克香豆素
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