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如何合成卡利普多人工抗原? 1

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卡利普多具有一定的毒性,因此进行卡利普多滥用检测的相关试剂及其产品的开发非常重要。


简介:卡利普多(Carisoprodol)是一种肌肉松弛剂类药物,主要用于治疗慢性背痛。卡利普多是一种临床处方药。在人体中卡利普多由CYP2C19酶通过N-脱烷基作用(N?dealkylation)转化为其活性代谢物氨甲丙二酯(眠尔通,安宁,meprobamate)。卡利普多代谢为其活性代谢物氨甲丙二酯的速度与CYP2C19酶多态性有关。CYP2C19基因多态性能影响卡利普多的药代动力学。

卡利普多的分子式:C12H24N2O4,分子量:260.33,其分子结构如式:

目前对卡利普多滥用的报道较为少见,但仍需引起注意,尤其是对那些有物质依赖倾向的患者。尽管卡利普多在治疗背痛和活化患者方面被证明很有效,但其被滥用的潜力和其过量服用的毒副作用却也招致很多批评。卡利普多常见的副作用包括头晕、嗜睡、恶心和心理损伤。虽然仅由carisoprodol导致的死亡并不常见,但carisoprodol致中毒的数量和严重程度的迅速上升令人担忧。因此进行卡利普多滥用检测的相关试剂及其产品的开发就成为需要。


卡利普多人工抗原:

凌世生等人报道了一种卡利普多人工抗原,其结构通式如下:

通过琥珀酸酐在卡利普多N上衍生出羧基,通过羧基与蛋白质偶联得到卡利普多及其衍生物检测抗原。其反应式如下:

抗原制备步骤如下:


1. 中间产物的制备

取卡利普多100mg(mw=260,1eq,0.38mmol)于50ml的圆底烧瓶中,加入5ml(mw=79;1.62mmol)吡啶。搅拌均匀后,加入丁二酸酐42.3mg(mw=100,1.2eq,0.423mmol)。在110℃下,搅拌反应16小时。反应结束后,用TLC检测,爬板展开剂的比例为DCM:MeOH=10:1,原料点无紫外,碘熏有黄色点,产物有紫外点Rf=0.8。后处理:将反应液通过水浴55℃减压将溶剂旋蒸拉干后,残留液加入20毫升DCM溶解,水洗有机相三次,每次20毫升,分液后再用20毫升饱和氯化钠洗有机相一次,分离出有机相,有机相再用无水硫酸钠干燥,45℃蒸干有机相溶剂得108mg。粗品经过过柱纯化得100mg产物A。过柱的淋洗剂比例为PE:EA=2:1;收率为72.5%。


13CNMR(DMSO)δ:157.3,70.6,28.5,70.9,157.2,42.8,23.6,23.6,17.4,35.4,17.6,14.6,175.7,28.5,31.2,177.0;


2. 中间产物偶联载体蛋白

1)100mg产物A溶于2ml DMF,浓度为50mg/ml。配置10mg/ml的PBS-BSA蛋白;


2)2ml×50mg/ml产物A中加入67mg EDC,41.4mg NHS,得产物B,室温搅拌8小时;


3)1步的PBS-BSA蛋白溶液20ml,然后滴入产物B,室温反应16小时得到终产物卡利普多抗原,用PBS透析3天,测得浓度为6.5mg/ml。


参考文献:

[1] 杭州安旭生物科技股份有限公司. 一种卡利普多抗原的合成方法及其应用. 2020-11-10.

[2] 杭州傲锐生物医药科技有限公司. 一种卡利普多人工抗原及其多抗和应用. 2020-12-29.

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