卡利普多抗原或抗原的制备是在生物医学研究和免疫学领域中至关重要的一步。本文将介绍制备卡利普多抗原或抗原的方法和技术，帮助读者深入了解这一过程。
简介：卡利普多(Carisoprodol)是一种肌肉松弛剂类药物，主要用于治疗慢性背痛。卡利普多是一种临床处方药。在人体中卡利普多由CYP2C19酶通过N-脱烷基作用(N-dealkylation)转化为其活性代谢物氨甲丙二酯(眠尔通,安宁，meprobamate)。卡利普多代谢为其活性代谢物氨甲丙二酯的速度与CYP2C19酶多态性有关。CYP2C19基因多态性能影响卡利普多的药代动力学。目前对卡利普多滥用的报道较为少见，但仍需引起注意，尤其是对那些有物质依赖倾向的患者。尽管卡利普多在治疗背痛和活化患者方面被证明很有效，但其被滥用的潜力和其过量服用的毒副作用却也招致很多批评。卡利普多常见的副作用包括头晕、嗜睡、恶心和心理损伤。
目前市面上没有可用于检测卡利普多的快速诊断试纸，也没有可用的卡利普多免疫抗原以及高效价，特异性强的抗卡利普多多克隆抗体。
1. 卡利普多抗原的合成
1.1 专利CN 111909257 A发明了一种卡利普多人工抗原的制备方法，通过琥珀酸酐在卡利普多N上衍生出羧基，通过羧基与蛋白质偶联得到卡利普多及其衍生物检测抗原。本发明的合成工艺中所使用的材料和催化剂均为普通产品，因此更具实用性，适于工业生产并能产生经济价值。具体步骤如下：
（1）称取一定量的卡利普多于50ml的圆底烧瓶中，加入吡啶；搅拌均匀后，加入丁二酸酐或者戊二酸酐，在110℃下，搅拌过夜；反应结束后，用TLC检测，爬板展开剂的比例为DCM:MeOH＝10：1，原料点无紫外，碘缸显示有黄色点；产物点有紫外Rf＝0.8；后处理：将反应液通过水浴55℃减压旋蒸拉干后，残留物加入DCM溶解，溶解后加入纯化水，洗涤有机相三次，再用饱和氯化钠洗涤有机相一次，再用无水硫酸钠干燥有机相，最后用水浴45℃蒸干溶剂得粗品SOMA-1；粗品经过纯化过柱得产物A；其中，过柱的淋洗剂比例为PE:EA＝2:1；卡利普多：吡啶：丁二酸酐/戊二酸酐＝1:4.3:1.2-2.0；
(2)产物偶联载体蛋白
a.取一定量产物A溶于2mlDMF，浓度为50mg/ml，配置10mg/ml的PBS-BSA蛋白；
b.在2ml×50mg/ml产物A中加入EDC、NHS，得产物B；其中，产物B:EDC:NHS＝1:1:1.12，室温搅拌8小时；
c.取a步骤中配置的PBS-BSA蛋白溶液20ml，然后滴入产物B，室温反应16小时，得到终产物卡利普多抗原，PBS透析3天，检测其浓度。
1.2 专利CN 112142838 B公开一种卡利普多人工抗原及其多抗和应用。一种卡利普多人工抗原KAL-BSA，其特征在于对卡利普多进行化学修饰，偶联BSA获得能诱导B细胞的增殖和分化继而产生特异性抗体的人工抗原。抗卡利普多多克隆抗体，通过采集免疫卡利普多人工抗原KAL-BSA的动物血清，再通过两步亲和层析法获得。修饰偶联后的KAL-BSA免疫抗原特异性好，能刺激动物产生大量抗卡利普多多克隆抗体，而非其他不需要的抗体，为后续纯化提供便利。抗卡利普多多克隆抗体通过BSA亲和柱和BGG亲和柱的纯化，在不大幅降低
抗体效价灵敏度的情况下，进一步提升灵敏度(检测限可达100ng/ml)，提高纯度。
2. 抗卡利普多的单克隆抗体
专利CN 116003615 A发明一些实施例提供了一种能结合卡利普多的抗体或其抗原结合片段及其应用。所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包括：如SEQ ID NO:1所示的CDRH1的氨基酸序列、如SEQ IDNO:2所示的CDRH2的氨基酸序列RAN、如SEQ ID NO:3所示的CDRH3的氨基酸序列；所述轻链可变区包括：如SEQ ID NO:4所示的CDRL1的氨基酸序列、CDRL2的氨基酸序列、如SEQ ID NO:6所示的CDRL3的氨基酸序列。
参考文献 ：
[1] 杭州旭科生物技术有限公司. 一种抗卡利普多的单克隆抗体及其应用:CN202310007281.2[P]. 2023-04-25.
[2] 杭州傲锐生物医药科技有限公司. 一种卡利普多人工抗原及其多抗和应用:CN202010717800.0[P]. 2021-11-16.
[3] 杭州安旭生物科技股份有限公司. 一种卡利普多抗原的合成方法及其应用:CN202010736865.X[P]. 2020-11-10.
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