第一，空白溶剂3.5min峰是否每次都一样面积？你能确定样品3.5min的那个峰不是来自溶剂？
建议用DAD看看，紫外行为是否一致；若一致，可能该峰来自溶剂，该方法还能用（但要明确此峰无干扰），否则，色谱条件应重新摸索。
第二，同一个样品溶液是指同一个样品配多瓶溶液，还是配一份在一个进样瓶里反复进样？
若一个样品配多瓶溶液，则需排除污染问题；若一个进样瓶多次进样，2min峰时有时无，则要排除方法不适用的问题。
建议延长进样时间（至少延长5min），或适当增加梯度，看看后面是否还有原方法没出的峰。
