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如何利用标签抗体HA进行蛋白质鉴定与纯化? 1

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标签抗体HA是一种兔抗红细胞凝集素表面抗原决定簇多克隆抗体,可以特异性地结合红细胞凝集素表面抗原决定簇,主要用于检测具有红细胞凝集素特性病毒的表面抗原决定簇。随着生物技术的发展,科研人员可以利用DNA重组技术构建包含目的基因和表位标记的融合蛋白,并通过特异性标签抗体HA对其进行鉴定与纯化,以满足研究需求。

融合标签的使用可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。常用的标签包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中HA标签系统利用一个HA短肽肽融合到目标蛋白的C端或N端,该系统已广泛应用于多种细胞类型,相应的HA标签抗体也被广泛应用。HA标签抗体能特异识别C末端或N末端带有HA标签的融合蛋白。

血球凝集素是一种能够使红血球凝集的抗体或其他物质,存在于流感病毒、痳疹病毒等病毒表面,可附着于不同动物的红血球,导致红血球凝集。红细胞凝集素表面抗原决定簇是由连续序列或不连续的蛋白质三维结构组成的特殊化学基团,决定抗原性的特性。抗原决定簇大多存在于抗原物质的表面,有些存在于抗原物质的内部,需要经过酶或其他方式处理后才能暴露出来。一个天然抗原物质可以有多种和多个决定簇,而抗原分子越大,决定簇的数目越多。

如何利用HA标签抗体进行研究?

基于甲型流感病毒红细胞凝集素颈部保守区表位免疫原的设计及其功能活性的研究

针对1968年至2014年间的H3N2流感病毒序列,科研人员进行了序列分析、B细胞及MHC-II类分子T细胞表位预测,从中获得了高度保守的HA颈部片段及六条衍生多肽免疫原序列(P1P6)。通过免疫原性检测,确定了P6多肽序列中含有潜在的B细胞及MHC-II类分子T细胞表位,并且基于P6多肽序列的MAP4及以KLH为载体的免疫原都能够诱导较强的体液免疫反应和H3亚型内交叉毒株中和活性。

通过对已知的H3亚型IAV的HA晶体结构分析,发现P6多肽序列位于病毒膜融合过程中HA2的变构拐点处。进一步通过实验验证,提出了P6多肽免疫原所诱导的中和抗体的中和机理:锚定HA2变构拐点,通过空间位阻抑制膜融合过程中HA2的变构,从而抑制膜融合。这一设计及中和机理的确定为未来流感疫苗的设计和流感病毒的临床免疫治疗提供了参考。

参考文献

[1] Xin Gong, He Yin, Yuhua Shi, Shanshan Guan, Xiaoqiu He, Lan Yang, Yongjiao Yu, Ziyu Kuai, Chunlai Jiang, Wei Kong, Song Wang, Yaming Shan. Conserved stem fragment from H3 influenza hemagglutinin elicits cross-clade neutralizing antibodies through stalk-targeted blocking of conformational change during membrane fusion. Immunology Letters. 2016.

[2] M. Elaish, K.I. Kang, M. Xia, A. Ali, S.A.S. Shany, L. Wang, X. Jiang, C.W. Lee. Immunogenicity and protective efficacy of the norovirus P particle-M2e chimeric vaccine in chickens. Vaccine. 2015.

[3] Shaoheng Chen, Dan Zheng, Changgui Li, Wenjie Zhang, Wenting Xu, Xueying Liu, Fang Fang, Ze Chen, Xuguang Li. Protection against Multiple Subtypes of Influenza Viruses by Virus-Like Particle Vaccines Based on a Hemagglutinin Conserved Epitope. BioMed Research International. 2015.

[4] Lishuang Zhang, Liang Miao, Xin Gong, Huayan Zhang, Lan Yang, Yuhua Shi, Wei Kong, Chunlai Jiang, Yaming Shan. Multiple antigen peptide mimetics containing gp41 membrane‐proximal external region elicit broad neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus type 1 in guinea pigs. J. Pept. Sci.. 2013.

[5] 龚鑫. 基于甲型流感病毒红细胞凝集素颈部保守区表位免疫原的设计及其功能活性的研究[D]. 吉林大学, 2016.

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