有关PCR的问题求助？

急需PCR大神的帮助，刚刚开始PCR设计了一段简并引物，我的目的条带大小是1500bp左右，可是P出来只有500bp，而且条带也很弱，在100bp那里还有比较粗的条带，但是不是很亮，是不是引物二聚体呢？不知道是什么原因，希望朋友能指点一二，不胜感激。

微信图片_20180731215545.jpg

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共8个回答

一般退火温度设置为50的时候就能跑出目的条带，如果出不来可能就是引物的关系，当然，也有可能是模板浓度过高了，与引物浓度比例不匹配，你可以先将其做个梯度稀释一下。

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提高退火温度或降低引物浓度，可改善，如果还不行，只能重新设计引物

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说明没p出来

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引物没问题的话就是条件合理性问题了，比如GC含量与退火温度，延伸时间，额外体系等

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中间那是marker吗？

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100bp左右的是引物二聚体，500bp处有条带说明你的引物特异性不够好，有没有用NCBI primer blast确认你的引物对特异性？提高Tm值试一下如果仍然扩增不出来可能需要重新设计引物了。

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100bp左右那条很大可能是二聚体了

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你重新跑一遍吧

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