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如何使用人α甘露糖苷酶(αManase)ELISA试剂盒测定样本中的α甘露糖苷酶含量? 1

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人α甘露糖苷酶(αManase)ELISA试剂盒是一种用于测定人血清、血浆及相关液体样本中α甘露糖苷酶(αManase)含量的试剂盒。

试验原理

人α甘露糖苷酶(αManase)ELISA试剂盒采用固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)进行检测。该方法利用已知αManase浓度的标准品和未知浓度的样品,在微孔酶标板内进行反应。首先,将αManase和生物素标记的抗体同时温育,然后进行洗涤。接下来,加入亲和素标记的HRP,再次进行温育和洗涤,去除未结合的酶结合物。最后,加入底物A、B与酶结合物同时作用,产生颜色。颜色的深浅与样品中αManase的浓度呈比例关系。

操作步骤

1. 在使用前,充分混匀所有试剂,避免产生大量泡沫,以防加样时加入大量气泡导致误差。

2. 根据待测样品数量和标准品的数量,确定所需的板条数。建议每个标准品和空白孔做复孔。每个样品根据数量确定,尽量使用复孔。将稀释后的标本稀释液1:1加入50ul反应孔内。

3. 将稀释后的标准品50ul加入反应孔,将待测样品50ul加入反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果使用洗板机洗涤,则增加一次洗涤。

5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果使用洗板机洗涤,则增加一次洗涤。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后立即测定结果。

9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

主要参考文献

[1] 吴丽民, 刘丽华, 洪伟雄。稻瘟病菌一假定α-甘露糖苷酶多克隆抗体的制备及应用。《中国农学通报》

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