如何进行人解脲脲原体抗体检测? ¹

人解脲脲原体抗体(UU-AB)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预先包被人解脲脲原体抗体(UU-Ab)捕获抗体的包被微孔中，按顺序加入标本、标准品和HRP标记的检测抗体，经过温育和洗涤。使用底物TMB进行显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，然后在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中的人解脲脲原体抗体(UU-Ab)呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），并计算样品浓度。

如何处理和保存样本？

1.对于全血标本，将其放置于室温2小时或4℃过夜后，以1000g离心20分钟，取上清进行检测。也可以将标本放于-20℃或-80℃保存，但要避免反复冻融。

2.对于血浆标本，可使用EDTA或肝素作为抗凝剂，采集后30分钟内以2 - 8°C进行1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但要避免反复冻融。

3.对于细胞培养物上清或其他生物标本，以1000g离心20分钟，取上清进行检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但要避免反复冻融。

注：溶血标本会影响检测结果，因此不宜使用溶血标本进行此项检测。

如何进行实验操作？

1.从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔中加入不同浓度的标准品50μL。

3.样本孔中加入待测样本50μL，空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，在37℃水浴锅或恒温箱中温育60分钟。

5.弃去液体，用吸水纸拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1分钟，甩去洗涤液，用吸水纸拍干，重复洗板步骤5次（也可使用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，在37℃避光条件下孵育15分钟。

7.每孔加入终止液50μL，在15分钟内，使用450nm波长测定各孔的OD值。

主要参考文献

[1] 赵季文 郑燕珊 徐翠瑜 汪宁 宋淑华 魏光秀 任桂珍 郭章溉 谢福晓。不同人群解脲脲原体和人型支原体抗体水平检测。《疾病监测》1993年 第2期。