如何使用Human Mouse myeloperoxidase-antineutrophil cytoplasmic antibody IgG,MPO-ANCA IgG ELISA kit进行定量检测? ¹

在这篇文章中，我们将介绍如何使用Human Mouse myeloperoxidase-antineutrophil cytoplasmic antibody IgG,MPO-ANCA IgG ELISA kit进行定量检测。该试剂盒可以用于测量血清、血浆和其他相关液体样本中人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG（MPO-ANCA IgG）的含量。

基本信息

英文名称：Human Mouse myeloperoxidase-antineutrophil cytoplasmic antibody IgG,MPO-ANCA IgG ELISA kit

保存条件：2-8℃

用途：用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG（MPO-ANCA IgG）的含量。

特点：具有高灵敏性、强特异性和良好的重复性。

试剂盒种属：适用于羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。

实验原理

该试剂盒采用双抗体夹心法测定标本中人髓磷脂碱性蛋白（MBP）的水平。首先，在微孔板上包被纯化的人髓磷脂碱性蛋白（MBP）抗体，形成固相抗体。然后，依次加入髓磷脂碱性蛋白（MBP）和HRP标记的髓磷脂碱性蛋白（MBP）抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，然后在酸的作用下转化成最终的黄色。样品中的髓磷脂碱性蛋白（MBP）浓度与颜色的深浅呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），可以计算出样品中髓磷脂碱性蛋白（MBP）的浓度。

操作步骤

1. 加样：在酶标包被板上设空白孔和待测样品孔。先加入样品稀释液40μl，然后再加入待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀。

2. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔。按照一定的稀释比例加入标准品和标准品稀释液，混匀。

3. 温育：封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释后备用。

5. 洗涤：揭掉封板膜，加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次。

6. 温育：操作同3。

7. 洗涤：操作同5。

8. 显色：加入显色剂A和显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

9. 加酶：加入酶标试剂。

10. 终止：加入终止液，终止反应。

11. 测定：以空白空调零，使用酶标仪在450nm波长下测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

主要参考文献

[1] 孙晓菁，陈旻，赵明辉。Rho GTP酶参与S1P诱导的MPO-ANCA阳性IgG介导的人肾小球内皮细胞的活化。第十三届全国免疫学学术大会。