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DMEM培养基的特点及使用方法? 1

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DMEM培养基是一种含有多种氨基酸和葡萄糖的培养基,它是在MEM培养基的基础上进行改良的。与MEM相比,DMEM增加了各种成分的用量,并分为高糖型和低糖型。低糖型DMEM含有1100毫克/升的葡萄糖,适用于干细胞的培养,而高糖型DMEM含有4500毫克/升的葡萄糖,适用于大多数哺乳动物细胞的培养,包括卵巢上皮细胞。

使用DMEM培养基的注意事项

1、长期保存DMEM培养基时,应放置在2-8℃的避光环境中,不要冷冻保存。

2、DMEM培养基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不稳定,易于分解。如果发现细胞生长变慢,可以在使用前加入适量的L-谷氨酰胺来维持细胞的正常代谢。

3、含有NaHCO3的DMEM培养基在开瓶多次后,培养基中的CO2会逐渐溢出,导致pH值升高,培养基的颜色会变为紫色。碱性的培养基会导致细胞生长停滞或死亡,建议将培养基分装成小瓶使用或使用HEPES来调节pH值至正常范围。

使用DMEM低糖(含双抗)的步骤

一)准确称量试剂:选择适合的DMEM低糖(含双抗)培养基,并确保所使用的试剂纯净。

二)校正pH值:将称量好的培养基成分放入容器中,加热溶解并补充水分,使用精密试纸或酸度计测定pH值,将其调节至适宜范围内。

三)过滤:将玻璃漏斗放在铁架上,使用DMEM低糖(含双抗)的纱布或滤纸过滤培养基,直至透明。

四)分装:将过滤后的培养基分装到试管或三角瓶中,每支试管装5mL,三角瓶中装100~150mL。使用棉塞塞好,并用牛皮纸包扎好,准备进行灭菌。

五)灭菌:常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。高压蒸汽灭菌可以彻底杀死微生物,而干热灭菌法效果较差。在湿热条件下,蒸汽能够穿透细菌的细胞壁,达到更好的杀菌效果。

参考文献

[1]DMEM低糖(含双抗)使用说明

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