本文将讲述如何测定2-甲氧基雌二醇的含量，旨在为相关领域的研究人员提供参考依据及实验支持。
背景：2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradio，2-ME)是内源性雌激素17β-雌二醇非极性的代谢产物。研究表明:2-ME对多种肿瘤细胞的增殖有抑制作用，可以通过下调转录因子(如缺氧诱导因子)来调节血管生成、抑制微管蛋白聚合而导致细胞死亡，并证实它对恶性肉瘤、乳腺癌、胃癌、肺癌、多发性骨髓 和前列腺癌等多种肿瘤有治疗作用。HPLC、 GC、放射免疫法及化学发光法等均可用于测定2-ME。
1. 高效液相色谱法
曾肖肖等人用高效液相色谱法成功测定制剂中2-ME含量。
（1）色谱条件
色谱柱：Akasil C18 (5 μm，4.6×250 mm)；流动相：甲醇：水=75:25 (v/v)；柱温：25 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μl；检测器：荧光检测器；检测波长：λ激发=288 nm，λ发射=325 nm。
（2）对照品溶液
精密称取适量的2-ME，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为20μg·ml- 1的溶液作为对照品溶液。
（3）空白辅料溶液
称取适量的乳糖、亮氨酸、泊洛沙姆，用超纯水溶解并稀释与对照品溶液相同的倍数，配制成空白辅料溶液。分别取上述溶液，按照色谱条件进样测定，记录色谱图。
（4）标准曲线的建立
精密称取2-ME原料药10 mg，置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，作为储备液。精密吸取上述储备液适量，配制成浓度为0.2、0.4、2、4、8、20、40 μg·ml- 1的2-ME系列标准溶液。按色谱条件进样检测，记录色谱图，并以所测得的2-ME峰面积 (A) 为纵坐标，浓度 (C) 为横坐标，进行线性回归，求得标准曲线方程。
（5）精密度实验
配制低、中、高三个浓度的2-ME标准溶液 (0.4 μg·ml-1、4 μg·ml- 1、20 μg·ml -1)，每个浓度各制备3份供试样品，分别于每天连续进样3次， 连续进样3天，进样监测，考察方法的日内、日间精密度。
（6）回收率实验
配制低、中、高三个浓度的2-ME标准溶液 (0.4 μg·ml-1、4 μg·ml- 1、20 μg·ml -1)，每个浓度各制备3份供试样品，进样检测，记录峰面积。根据标准曲线计算测定浓度 (C测)，以测定浓度与配制浓度 (C标) 之比，计算回收率。
（7） 最小检测限和最低定量限的测定
取2-ME储备液适量，用甲醇稀释配制成一系列较低浓度的2-ME标准溶液， 按色谱条件进样测定，以色谱图中的信号 (S) 与噪音 (N) 比值为3时，所对应的溶液浓度为最低检测限，以S/N=10时所对应的溶液浓度为最低定量限。
（8）样品含量测定
精密称取适量2-ME干粉吸入剂，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成一定浓 度的样品溶液。取该溶液2 ml经10000 rpm离心15 min，取上清液按照色谱条件进样测定，根据标准曲线方程计算样品中的药物含量。
2. 荧光碳量子点催化鲁米诺发光体系测定
李文武等人利用微波热解法合成荧光CQDs，基于CQDs对鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系的催化作用提高发光背景，依据2-ME对CQDs-鲁米诺-铁氰化钾发光体系的强烈抑制作用，实现了制剂和生物样品中2-ME的含量测定。该方法灵敏度高，线性范围较宽，操作简便且结果准确。与金属量子点增敏化学发光相比，荧光CQDs具有生物相容性好、毒性低及经济环保等优点，具有广阔的应用前景。
参考文献：
[1]李文武,赵维维,张素歌等. 荧光碳量子点催化鲁米诺发光体系测定2-甲氧基雌二醇 [J]. 郑州大学学报(医学版), 2017, 52 (04): 419-423. DOI:10.13705/j.issn.1671-6825.2017.04.011
[2]曾肖肖. 2-甲氧基雌二醇干粉吸入剂的研究[D]. 郑州大学, 2014.
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