超氧化物歧化酶的制备方法及应用？ ¹

超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)是一种重要的氧化还原金属酶，能够有效清除体内的超氧自由基阴离子，预防其对机体的损害。SOD酶广泛存在于动物、植物和微生物等各种生物体内。

如何制备超氧化物歧化酶？

方法一：

一种从蒜片加工废水中提取大蒜超氧化物歧化酶的方法：

首先，使用多个400目的不锈钢筛网作为支撑材料，并在其上均匀涂上5毫米厚的硅藻土过滤层。然后，将蒜片加工废水通过泵循环，经过筛网和硅藻土过滤，去除大颗粒杂质和胶体物质。接下来，将过滤后的废水加热至75℃，加热时间为20分钟，使杂蛋白变性絮凝。冷却后，再经过硅藻土挂膜过滤，去除杂蛋白质。最后，将废水通过分子印迹树脂柱，吸附大蒜超氧化物歧化酶，并用洗脱剂洗脱，最终得到粉状的大蒜超氧化物歧化酶。

该方法提取率为0.05％，酶比活性为2670U/mg。

方法二：

一种利用结晶法分离提纯超氧化物歧化酶的方法：

首先，利用超声破碎仪破碎细菌发酵培养液，并经过离心和调节溶液pH，得到蛋白溶液。然后，使用超滤膜将蛋白溶液浓缩至一定浓度。接下来，将沉淀剂溶解在柠檬酸溶液中，加入到蛋白溶液中，并加入籽晶，进行结晶。结晶完成后，离心得到超氧化物歧化酶晶体混合物。最后，使用PEG8000溶液进行洗涤，重复结晶过程多次，得到纯度更高的超氧化物歧化酶晶体。

该方法可以得到纯度为95％，比活力为4335U/mg的超氧化物歧化酶。

参考文献

[1][中国发明,中国发明授权]CN202010360991.X超氧化物歧化酶及其制备方法、超氧化物歧化酶口服液和固体制剂

[2][中国发明]CN201810289241.0一种利用结晶法分离提纯超氧化物歧化酶的方法