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嘌呤霉素慢病毒稳转株,为什么所有的细胞都会漂浮?

嘌呤霉素慢病毒稳转株遇到的问题,食管鳞癌eca109细胞,确定嘌呤霉素的杀灭曲线。

用了2、4、6、8、10 ug/ml的浓度做了5个孔,24孔板铺板密度5*10(4),培养过夜后见细胞贴壁后加入不同浓度的含药物培养基

3天以后发现各孔细胞均漂浮,无贴壁细胞。部分细胞死亡,部分细胞形态正常。形态正常的细胞各孔数量相差不大。

请问:1、接下来应该怎么办?将细胞收集离心后再用含药物培养基继续筛选吗?

           2、为什么所有细胞都会漂浮?死了的细胞可以理解,正常的细胞不应该继续贴壁吗?

           3、你们大概培养多少天才能出杀死全部细胞?


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共2个回答
不要等贴壁再加,铺板的时候就在孔内加入嘌呤霉素,2-3天后观察细胞情况,死细胞太多看不清楚就换液,然后确定全部杀死的孔。
有做过预实验吗?如果第一次摸浓度,那梯度太小了,正常先10倍倍比做个预实验,确定最小致死范围,再2倍倍比做正式实验。    
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