稳定细胞株的构建对于各种研究应用非常重要，例如重组蛋白和抗体生产、基因编辑以及功能性研究等。构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，然后将载体转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，最后利用载体中所含的抗性标志进行筛选。常用的抗性筛选标志物有新霉素、潮霉素和嘌呤霉素，其中G418常用于选择性筛选。通过这种方法可以得到稳定表达目的蛋白或者沉默特定基因的细胞株。
构建稳定细胞株的过程需要经历多个步骤，其中细胞转染是非常关键的一步。常用的转染方法包括物理方法（如电转）、化学方法（如脂质体）以及生物方法（如病毒）。根据实验条件的不同，选择最适合的方法来达到实验目的。
目的蛋白的过表达是研究基因/蛋白功能的常规手段之一，也可以通过表达系统富集蛋白的方法（如DHFR、GS系统）来得到大量的目的蛋白。构建蛋白过表达稳定细胞株可以很好地帮助研究该蛋白的功能。
主要步骤包括：
1. 载体构建（表达质粒载体、病毒载体）；
2. 转染/感染；
3. 目的蛋白初步检测；
4. 抗生素筛选；
5. 目的蛋白再次检测（定性/半定量）；
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）是真核细胞信号传导的重要通路，其中p38作为该家族的亚族之一，在细胞内参与应激反应、增殖、凋亡等多种生物学过程。研究发现通过p38MAPK通路诱导前列腺癌细胞凋亡可以治疗前列腺癌。
为了研究p38MAPK的功能以及为未来治疗靶点的研究提供工具，可以将外源性的p38MAPK导入细胞内，并使细胞稳定持续表达。在将外源基因转入宿主细胞并使其表达的过程中，选择合适的携带载体非常关键。目前常用的基因转导载体包括病毒载体和非病毒载体。其中，慢病毒载体具有转导分裂细胞和非分裂细胞的能力，能够实现长期而稳定的基因表达，并且不会引起宿主免疫反应。
在前列腺癌的动物实验中，常用的方法包括荧光蛋白法和生物发光法来监测肿瘤细胞或者肿瘤组织的发生发展过程。荧光蛋白作为报告基因在细胞内分子影像领域具有广泛的应用。
[1] Applications of bioluminescence imaging to antiviral research and therapy: multiple luciferase enzymes and quantitation. Luker K E, Luker G D. Antiviral Research. 2008.
[2] A capsid-modified helper-dependent adenovirus vector containing the beta-globin locus control region displays a nonrandom integration pattern and allows stable, erythroid-specific gene expression. Wang H, Shayakhmetov DM, Leege T, et al. Journal of Virology. 2005.
[3] Firefly luciferase and RLuc8 exhibit differential sensitivity to oxidative stress in apoptotic cells. Czupryna J, Tsourkas A. PLoS One. 2011.
[4] A comparison of imaging techniques to monitor tumor growth and cancer progression in living animals. Puaux A L, Ong L C, Jin Y, et al. Int J Mol Imaging. 2011.
[5] 荆玉明. 慢病毒法建立表达外源基因的人前列腺癌稳定细胞株[D]. 南方医科大学, 2012.
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