本文将探讨如何制备银杏内酯C，这是一种在植物中广泛存在的次生代谢产物，具有多种生物学活性和药理作用。通过介绍制备方法和反应条件，我们可以更深入地了解银杏内酯C的合成过程和相关应用领域。
简述：银杏(Ginkgo biloba L.)为银杏科银杏属植物，大约出现于二亿年前，在冰川世纪几近灭种，仅在我国幸存，被达尔文称为“活化石”。随着对银杏叶研究的深入，现已证明：银杏叶的活性成分主要是黄酮和内酯类化合物。其中内酯类化合物有：银杏内酯A(BN52020)、银杏内酯B(BN52021)、银杏内酯C(BN52022)、银杏内酯M(BN52023)、银杏内酯J(BN52024)及白果内酯。研究表明，银杏内酯均为强血小板活化因子(platelet-activatingfactor，PAF)受体拮抗剂。它们独特的药理作用和治疗价值已引起世界范围制药界的极大兴趣。为了提高其药用治疗效果，有时必须将各单体分离纯化。银杏内酯C的结构如下：
制备：
1. 方法一
（1）取3.4kg晒干银杏叶(银杏内酯C的含量为0.1％)，水洗一次，用17L含80％乙醇的水溶液在60℃下浸泡提取2h后，离心取上清液，此操作重复两次，合并两次上清液，在35℃下旋蒸除去乙醇，得到醇提物浓缩液。
（2）用盐酸调节上述浓缩液的pH至4，每次用1/2浓缩液体积的乙酸乙酯萃取两次，萃取后弃去萃余相，向萃取相中加入pH为2～5的蒸馏水，振荡混合后弃去水相，并将酯相在30℃下旋蒸至乙酸乙酯完全除去；再用含10％乙醇的水溶液溶解银杏内酯C粗品，并用盐酸将其pH调整到2.5。
（3）取预处理后的大孔吸附树脂NM PS100(树脂预处理步骤：采用含1N盐酸的70％丙酮水溶液冲洗树脂，用量约为3BV，再用去离子水洗到中性)装于Φ80×350mm层析柱中，将银杏内酯C粗品的乙醇溶液上大孔吸附树脂NM PS100，上柱后先用5BV含20％乙醇的水溶液除杂，再用4BV含30％乙醇的水溶液将银杏内酯C集中洗下，分步收集洗脱液，并通过HPLC检测，将银杏内酯C纯度大于80％的洗脱液混合，树脂柱提取收率为86.5％。
（4）将混合液在25℃条件下缓慢浓缩至无醇味，调pH至3，用等体积乙酸乙酯萃取一次，旋干酯相，用适量无水乙醇溶解后，加入约5倍体积的蒸馏水，待出现混浊后，于4℃冰箱中静置过夜结晶，得到银杏内酯C粗晶体，抽滤，用蒸馏水洗涤粗晶体一次，再用少量无水乙醇溶解，加入5倍体积的蒸馏水，待出现混浊后，于4℃冰箱中静置过夜结晶，得到银杏内酯C晶体1.76g，HPLC检测其纯度为98.4％，总收率为51.7％。
2. 方法二
取银杏叶提取物（EGB）（银杏总内酯含量≥6%）1g悬浮于10mL水中，用乙酸乙酯萃取三次，每次10mL，萃取溶液于60℃减压回收溶剂，萃取物60℃加热溶于20mL水中，用50mL的MCI-GEL树脂进行吸附，吸附时间为0.5h，先用10%的乙醇洗脱2BV除杂，再用30%乙醇洗脱树脂2BV，洗脱液于60℃减压蒸干得银杏内酯C粗品，回收溶剂，加入50%乙醇（1.5mL），60℃加热溶解后，放置冰箱12h，析出结晶，反复重结晶2次，用纯化水（1mL）洗晶3次，于65℃真空加热烘干，得到银杏内酯C（16mg，HPLC-ELSD检测含量为98.3%）。
3. 方法三
（1）取10千克银杏叶，用100升体积浓度为80％的乙醇在50℃时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用60升体积浓度为55％的乙醇在70℃时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用50升体积浓度为25％的乙醇在50℃时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至100升浓缩液；
（2）向浓缩液中加入100升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机相，回收有机相后浓缩得到500克浸膏；
（3）将步骤（2）中所得浸膏加50倍体积水稀释后上ADS-15柱，先用水洗，直至流出液无色，再用15升体积浓度为50％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至浸膏，再用体积浓度为50％的乙醇结晶，得到70克银杏内酯类化合物晶体；
（4）将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液进行梯度洗脱，其中，正己烷和乙酸乙酯的体积比为9∶1-2∶8；在洗脱过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待溶剂峰出完后的第五个峰处开始收集洗脱液，得到富集银杏内酯C的洗脱液；
（5）回收步骤（5）中收集的洗脱液中的溶剂，再用体积浓度为30％的乙醇对其结晶，得到银杏内酯C单体4.72克。
参考：
[1]上海医药工业研究院. 一种银杏内酯C的制备方法. 2012-05-23.
[2]上海信谊百路达药业有限公司. 一种银杏内酯C的分离纯化方法. 2013-11-20.
[3]桂林市振达生物科技有限责任公司. 从银杏叶中提取分离银杏内酯C的方法. 2009-04-22.
1
